| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-20页 |
| 缩略词表 | 第20-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-45页 |
| ·启动子 | 第24-30页 |
| ·启动子的来源 | 第25-27页 |
| ·启动子的类型 | 第27-30页 |
| ·NISIN诱导表达系统 | 第27-29页 |
| ·其它诱导表达系统 | 第29-30页 |
| ·信号肽(SIGNAL PEPTIDE,SP) | 第30-31页 |
| ·乳酸菌细胞壁锚定蛋白 | 第31-40页 |
| ·与细胞膜共价结合的锚定结构域 | 第34-36页 |
| ·LPXTG锚定结构域 | 第36-37页 |
| ·LYSM基序 | 第37-39页 |
| ·细胞表层蛋白锚定结构域 | 第39-40页 |
| ·新型乳酸菌表面展示系统 | 第40-43页 |
| ·乳酸乳球菌外壳-蛋白锚定系统 | 第40-42页 |
| ·基于纤维小体DOCKERIN和COHESIN相互作用的细胞表面展示系统 | 第42-43页 |
| ·研究内容 | 第43-45页 |
| 第二章 高黏附乳杆菌的分离及其表面蛋白的鉴定 | 第45-57页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·菌株以及样品来源 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第46-48页 |
| ·方法 | 第48-50页 |
| ·肠道乳杆菌的分离 | 第48页 |
| ·乳杆菌黏附特性测定 | 第48页 |
| ·表层蛋白的提取 | 第48-49页 |
| ·菌株鉴定 | 第49页 |
| ·表层蛋白基因克隆 | 第49-50页 |
| ·透射电子显微镜观察 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·肠道乳杆菌的分离以及菌落形态 | 第50-51页 |
| ·乳杆菌黏附特性的测定 | 第51-52页 |
| ·乳杆菌表层蛋白分析 | 第52页 |
| ·LB.CIRSPATUS K2-4-3透射电镜观察 | 第52-53页 |
| ·表层蛋白基因的克隆以及序列分析 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 利用S层蛋白构建乳酸菌表面展示体系及其潜在应用研究 | 第57-81页 |
| ·材料 | 第58-60页 |
| ·菌株以及质粒 | 第58页 |
| ·培养基及试剂 | 第58-60页 |
| ·方法 | 第60-68页 |
| ·重组质粒构建 | 第60-61页 |
| ·大肠杆菌感受态制备、转化以及蛋白表达 | 第61-62页 |
| ·HIS-TAG蛋白纯化方法 | 第62-63页 |
| ·结合反应 | 第63页 |
| ·绿色荧光蛋白的测定 | 第63页 |
| ·不同处理对绿色荧光蛋白结合的影响 | 第63-64页 |
| ·LCSB结合量测定 | 第64页 |
| ·半乳糖苷酶展示和酶活测定 | 第64页 |
| ·纤维素酶的展示和酶活测定 | 第64-65页 |
| ·乳酸乳球菌感受态制备 | 第65页 |
| ·NISIN诱导蛋白表达以及提取方法 | 第65-66页 |
| ·WESTERN BLOT以及荧光扫描分析 | 第66-67页 |
| ·免疫荧光以及SDS敏感性测定 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-79页 |
| ·LCSB序列分析 | 第68-69页 |
| ·绿色荧光蛋白的表达和展示 | 第69-70页 |
| ·不同化学处理对LCSB结合的影响以及结合量的测定 | 第70-72页 |
| ·半乳糖苷酶的表达以及展示 | 第72-74页 |
| ·纤维素酶的表达以及结合 | 第74-76页 |
| ·绿色荧光蛋白在乳球菌表面的靶向表达 | 第76-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第四章 两种亚型的禽流感病毒血凝素蛋白在乳杆菌细胞表面的展示及其对小鼠的免疫原性 | 第81-91页 |
| ·材料 | 第81-82页 |
| ·菌株与培养 | 第81-82页 |
| ·培养基 | 第82页 |
| ·试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-85页 |
| ·禽流感病毒RNA提取及反转录 | 第82页 |
| ·血凝素基因(HA)的克隆以及HA-LCSB融合蛋白表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·融合蛋白表达、纯化以及WESTERN BLOT | 第83页 |
| ·融合蛋白和乳杆菌的结合及检测 | 第83-84页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-88页 |
| ·HA-LCSB融合蛋白表达及WESTERN BLOT | 第85-86页 |
| ·HA在乳酸菌表面的展示 | 第86-87页 |
| ·免疫荧光分析 | 第87-88页 |
| ·免疫小鼠实验 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| 第五章 利用乳杆菌裂解酶的LYSM重复序列构建细胞表面展示体系及性能研究 | 第91-107页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·菌株及培养 | 第91-92页 |
| ·培养基 | 第92页 |
| ·试剂 | 第92页 |
| ·方法 | 第92-95页 |
| ·载体构建 | 第92-93页 |
| ·融合蛋白纯化方法 | 第93页 |
| ·绿色荧光蛋白检测方法 | 第93-94页 |
| ·结合反应以及条件优化 | 第94-95页 |
| ·半乳糖苷酶酶活测定 | 第95页 |
| ·结果 | 第95-106页 |
| ·LY5C序列分析 | 第95-97页 |
| ·绿色荧光蛋白的表面展示 | 第97-100页 |
| ·不同处理对LY5C结合的影响 | 第100-102页 |
| ·结合反应条件优化 | 第102-103页 |
| ·GFP-LY5C结合量 | 第103-105页 |
| ·半乳糖苷酶的展示 | 第105-106页 |
| ·讨论 | 第106-107页 |
| 第六章 NISIN诱导型合成启动子库构建 | 第107-117页 |
| ·材料 | 第107-108页 |
| ·菌株和载体 | 第107页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第107-108页 |
| ·方法 | 第108-111页 |
| ·NISIN启动子的克隆以及合成突变体库的建立 | 第108页 |
| ·P0和P2启动子的比较 | 第108-109页 |
| ·合成启动了的筛选以及稳定性分析 | 第109-110页 |
| ·乳酸菌质粒提取方法 | 第110-111页 |
| ·半乳糖苷酶的表达 | 第111页 |
| ·启动子序列测定 | 第111页 |
| ·结果与讨论 | 第111-115页 |
| ·P0和P2启动子比较 | 第111-112页 |
| ·合成启动子库构建 | 第112-114页 |
| ·启动子稳定性分析 | 第114页 |
| ·启动子序列分析 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-134页 |
| 攻读博士学位论文期间发表论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 外文写作 | 第136-171页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第171页 |
