| 英文缩略词 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-18页 |
| 1. 材料和方法 | 第18-58页 |
| 1.1 实验材料和试剂配制 | 第18-24页 |
| 1.1.1 实验仪器 | 第18-19页 |
| 1.1.2 实验耗材 | 第19页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第19-21页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第21-23页 |
| 1.1.5 载体及菌株 | 第23-24页 |
| 1.1.5.1 克隆载体 | 第23-24页 |
| 1.1.5.2 宿主细菌 | 第24页 |
| 1.1.6 生物样本 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-57页 |
| 1.2.1 尿液HCV RNA检测体系的建立 | 第24-34页 |
| 1.2.1.1 尿液标本的处理 | 第24-26页 |
| 1.2.1.2 尿液HCV RNA的提取 | 第26-30页 |
| 1.2.1.3 尿液HCV RNA扩增反应体系和循环参数的设置 | 第30-34页 |
| 1.2.1.4 定量PCR标准曲线的建立 | 第34页 |
| 1.2.2 模拟样本的制备 | 第34-50页 |
| 1.2.2.1 模拟样本片段的选择 | 第34-35页 |
| 1.2.2.2 HCV RNA 5'-UTR区域cDNA序列的获取 | 第35-37页 |
| 1.2.2.3 模拟样本目的片段的扩增 | 第37-40页 |
| 1.2.2.4 目的片段扩增产物的验证 | 第40-44页 |
| 1.2.2.5 目的片段的获取 | 第44-45页 |
| 1.2.2.6 体外转录 | 第45-48页 |
| 1.2.2.7 体外转录产物的纯化与验证 | 第48-49页 |
| 1.2.2.8 模拟样本的配制和定量 | 第49-50页 |
| 1.2.3 检测体系的方法学性能评价 | 第50-52页 |
| 1.2.3.1 分析灵敏度 | 第50-51页 |
| 1.2.3.2 精密度 | 第51页 |
| 1.2.3.3 分析特异性 | 第51页 |
| 1.2.3.4 线性 | 第51-52页 |
| 1.2.4 血浆HCV RNA的定量检测 | 第52-54页 |
| 1.2.5 尿液HCV RNA的定量检测 | 第54-57页 |
| 1.2.5.1 尿液HCV RNA绝对浓度的定量检测 | 第56页 |
| 1.2.5.2 尿液HCV RNA片段大小分布的探究 | 第56-57页 |
| 1.3 数据统计分析 | 第57-58页 |
| 2. 结果 | 第58-84页 |
| 2.1 尿液HCV RNA新检测体系的确立 | 第58-64页 |
| 2.1.1 核酸提取方法的确定 | 第58页 |
| 2.1.2 扩增体系和循环参数的确定 | 第58-61页 |
| 2.1.2.1 第一种扩增体系和循环参数 | 第58-59页 |
| 2.1.2.2 第二种扩增体系和循环参数 | 第59-60页 |
| 2.1.2.3 第三种扩增体系和循环参数 | 第60-61页 |
| 2.1.3 尿液HCV RNA新检测体系 | 第61-64页 |
| 2.1.4 尿液常规生化分析结果 | 第64页 |
| 2.2 模拟样本制备 | 第64-74页 |
| 2.2.1 目的片段扩增产物的验证 | 第64-70页 |
| 2.2.1.1 琼脂糖凝胶电泳验证目的片段 | 第65页 |
| 2.2.1.2 测序方法验证目的片段 | 第65-70页 |
| 2.2.2 以质粒为模板的目的片段的获取 | 第70-72页 |
| 2.2.2.1 琼脂糖凝胶电泳验证目的片段 | 第71页 |
| 2.2.2.2 目的片段的定量 | 第71-72页 |
| 2.2.3 体外转录 | 第72-74页 |
| 2.2.3.1 体外转录中模板量的确定 | 第72-73页 |
| 2.2.3.2 转录产物的定量 | 第73-74页 |
| 2.2.4 模拟样本的配制 | 第74页 |
| 2.3 检测体系的方法学性能评价 | 第74-77页 |
| 2.3.1 分析灵敏度 | 第74-75页 |
| 2.3.2 精密度 | 第75-76页 |
| 2.3.2.1 批内精密度 | 第76页 |
| 2.3.2.2 批间精密度 | 第76页 |
| 2.3.3 特异性 | 第76页 |
| 2.3.4 线性 | 第76-77页 |
| 2.4 血浆HCV RNA的定量检测 | 第77-79页 |
| 2.5 尿液HCV RNA的定量检测 | 第79-83页 |
| 2.5.1 尿液HCV RNA的绝对定量检测 | 第80-82页 |
| 2.5.2 尿液HCV RNA片段大小分布的探究 | 第82-83页 |
| 2.6 血液和尿液中HCV RNA浓度的临床相关性分析 | 第83-84页 |
| 3. 讨论 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 论文综述 | 第94-120页 |
| Reference | 第112-120页 |
| 附录 | 第120-136页 |
| 附录1. pMD18-T载体信息 | 第120-123页 |
| 附录2. HCV各亚型在GENBANK的详细信息 | 第123-128页 |
| 附录3. HCV各基因型序列的保守区序列 | 第128-131页 |
| 附录4. 模拟样本中目的片段扩增所用引物对及其对应的目的片段序列 | 第131-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
| 个人简介 | 第138-139页 |
