| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-28页 |
| 第一节 人类免疫缺陷病毒概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 HIV-1的生物学特征 | 第12-14页 |
| 1.1.2 HIV-1的生活周期 | 第14-16页 |
| 第二节 CRISPR/Cas基因编辑技术 | 第16-20页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统 | 第16页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas系统作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas系统多样性与分类 | 第17-20页 |
| 第三节 CRISPR/Cas9在HIV-1治疗中研究进展 | 第20-24页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9介绍 | 第20页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9编辑宿主基因 | 第20-21页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9编辑HIV-1基因组 | 第21-24页 |
| 1.3.3.1 CRISPR/Cas9失活整合的HIV-1 | 第21-22页 |
| 1.3.3.2 CRISPR/Cas9抵抗新感染的HIV-1 | 第22页 |
| 1.3.3.3 HIV逃逸CRISPR/Cas9抑制 | 第22-23页 |
| 1.3.3.4 CRISPR/dCas9抗HIV感染中的应用 | 第23页 |
| 1.3.3.5 CRISPR/Cas9传递途径 | 第23-24页 |
| 第四节 CRISPR/Cas13a靶向编辑单链RNA | 第24-27页 |
| 1.4.1 CRISP/Cas13a介绍 | 第24-25页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas13a在单链RNA编辑中的应用 | 第25-27页 |
| 第五节 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-53页 |
| 第一节 实验材料 | 第28-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第28页 |
| 2.1.2 细胞 | 第28页 |
| 2.1.3 质粒 | 第28-31页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第31页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.5.1 工具酶类 | 第31页 |
| 2.1.5.2 抗体 | 第31页 |
| 2.1.5.3 其他试剂 | 第31页 |
| 2.1.5.4 分析软件 | 第31-32页 |
| 2.1.5.5 溶液配制 | 第32-33页 |
| 第二节 实验方法 | 第33-53页 |
| 2.2.1 基因工程 | 第33-40页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第40-43页 |
| 2.2.2.1 完全细胞培养基配制 | 第40页 |
| 2.2.2.2 细胞复苏 | 第40页 |
| 2.2.2.3 细胞冻存 | 第40-41页 |
| 2.2.2.4 细胞传代 | 第41页 |
| 2.2.2.5 细胞计数 | 第41页 |
| 2.2.2.6 细胞转染 | 第41-43页 |
| 2.2.3 HIV慢病毒包装 | 第43页 |
| 2.2.4 病毒超离纯化 | 第43页 |
| 2.2.5 细胞活力检测方法 | 第43-44页 |
| 2.2.6 流式细胞术 | 第44页 |
| 2.2.7 蛋白印迹 | 第44-47页 |
| 2.2.8 激光共聚焦免疫荧光成像 | 第47页 |
| 2.2.9 细胞总DNA提取 | 第47-48页 |
| 2.2.10 病毒RNA提取与反转录 | 第48-49页 |
| 2.2.11 病毒基因突变检测 | 第49-50页 |
| 2.2.12 HIV基因组定量检测 | 第50-52页 |
| 2.2.13 统计学分析 | 第52-53页 |
| 第三章 结果与分析 | 第53-79页 |
| 第一节 CRISPR/Cas9抑制HIV-1复制 | 第53-72页 |
| 3.1.1 靶向sgRNA的设计筛选 | 第53-54页 |
| 3.1.2 Cas9-NLS/sgRNA质粒表达对细胞活力无影响 | 第54-55页 |
| 3.1.3 Cas9-NLS/sgRNA抑制 HIV-1复制 | 第55-62页 |
| 3.1.3.1 Cas9-NLS/sgRNA抑制HIV-1基因表达 | 第55-56页 |
| 3.1.3.2 CRISPR/Cas9编辑导致HIV-1基因组突变 | 第56-58页 |
| 3.1.3.3 Cas9/sgRNA编辑抑制子代病毒生产 | 第58-59页 |
| 3.1.3.4 Cas9/sgRNA编辑抑制子代病毒复制 | 第59-62页 |
| 3.1.4 CRISPR/Cas9降低HIV-1反转录以及整合的基因组拷贝数 | 第62-64页 |
| 3.1.5 Cas9酶活性在其抑制HIV-1复制中的作用 | 第64-65页 |
| 3.1.6 Cas9-delNLS/sgRNA在细胞质中编辑HIV-1 DNA | 第65-69页 |
| 3.1.6.1 Cas9-delNLS定位在细胞质 | 第65-66页 |
| 3.1.6.2 Cas9-delNLS抑制HIV-1复制 | 第66-68页 |
| 3.1.6.3 Cas9-delNLS/sgRNA抑制HIV-1 DNA合成 | 第68-69页 |
| 3.1.7 Cas9-delNLS不能编辑整合的基因组 | 第69-72页 |
| 3.1.7.1 Cas9-delNLS不能编辑整合的gfp基因 | 第69-70页 |
| 3.1.7.2 Cas9-delNLS对整合的HIV-1基因表达没有抑制作用 | 第70-72页 |
| 第二节 CRIPSR/Cas13a干扰HIV-1复制 | 第72-79页 |
| 3.2.1 Cas13a/crRNA干扰真核细胞中瞬时转染的基因的表达 | 第72页 |
| 3.2.2 Cas13a/crRNA干扰稳定表达细胞系中基因的表达 | 第72-74页 |
| 3.2.3 Cas13a/crRNA干扰HIV-1质粒的表达 | 第74-76页 |
| 3.2.4 Cas13a/crRNA干扰HIV-1复制 | 第76页 |
| 3.2.5 Cas13a/crRNA干扰HIV-1基因表达依赖其RNase活性 | 第76-79页 |
| 第四章 讨论 | 第79-83页 |
| 第一节 CRISPR/Cas9靶向编辑HIV-1复制周期中多个步骤 | 第79-81页 |
| 第二节 CRISPR/Cas9编辑降低HIV-1基因组拷贝数 | 第81-82页 |
| 第三节 CRISPR/Cas13a干扰HIV-1复制 | 第82-83页 |
| 第五章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 综述 | 第95-108页 |
| 参考文献 | 第103-108页 |
| 附录 | 第108-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 个人简历 | 第114-115页 |
| 在学期间发表论文 | 第115页 |
