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寨卡病毒解旋酶水解机制的研究

摘要第3-4页
abstract第4页
第1章 引言第8-28页
    1.1 寨卡病毒的病原学特征第8-9页
    1.2 寨卡病毒的流行病学特征第9-11页
        1.2.1 寨卡病毒流行区域第9-11页
        1.2.2 寨卡病毒的传播第11页
            1.2.2.1 蚊媒传播第11页
            1.2.2.2 母婴传播第11页
            1.2.2.3 血液传播第11页
            1.2.2.4 性传播第11页
    1.3 寨卡病毒感染的临床表现第11-12页
    1.4 寨卡病毒的诊断、预防和治疗第12-13页
    1.5 寨卡病毒结构的研究进展第13-20页
        1.5.1 寨卡病毒解旋酶的结构研究进展第13-15页
        1.5.2 寨卡病毒其他功能蛋白的结构研究进展第15-20页
            1.5.2.1 全病毒结构研究第15页
            1.5.2.2 结构蛋白C的结构研究第15-16页
            1.5.2.3 结构蛋白E的结构研究第16-17页
            1.5.2.4 非结构蛋白NS1的结构研究第17-18页
            1.5.2.5 非结构蛋白NS2B-NS3pro的结构研究第18-19页
            1.5.2.6 非结构蛋白NS5 的结构研究第19-20页
    1.6 其他病毒的解旋酶研究第20-21页
    1.7 ATP水解机制研究进展第21-25页
        1.7.1 SF1 helicase解旋酶的水解机制研究第22-23页
        1.7.2 SF2 helicase解旋酶的水解机制研究第23-25页
            1.7.2.1 丙型肝炎病毒解旋酶的水解机制研究第23页
            1.7.2.2 登革热病毒解旋酶的水解机制研究第23-24页
            1.7.2.3 登革热病毒解旋酶的水解机制研究第24-25页
    1.8 研究内容与意义第25-28页
第2章 材料与方法第28-50页
    2.1 实验材料第28-34页
        2.1.1 cDNA第28页
        2.1.2 载体第28页
        2.1.3 扩增及突变引物第28-29页
        2.1.4 感受态细胞第29页
        2.1.5 实验仪器第29-31页
        2.1.6 实验试剂第31-34页
            2.1.6.1 基础原料信息第31-33页
            2.1.6.2 培养基及部分储液配方第33-34页
    2.2 实验方法第34-50页
        2.2.1 原核表达载体的构建第34-41页
            2.2.1.1 目的基因的聚合酶链式反应(PCR)第34-35页
            2.2.1.2 目的片段的验证和纯化回收第35-37页
            2.2.1.3 目的基因及载体的双酶切第37页
            2.2.1.4 目的基因与载体的连接第37-38页
            2.2.1.5 重组质粒的感受态细胞转化第38页
            2.2.1.6 重组质粒的提取第38-40页
            2.2.1.7 重组质粒的双酶切验证第40-41页
            2.2.1.8 重组质粒的测序第41页
        2.2.2 蛋白的表达与纯化第41-46页
            2.2.2.1 重组质粒转化入表达菌株第41页
            2.2.2.2 目的蛋白的试表达及优化第41-43页
            2.2.2.3 目的蛋白的大量表达和纯化第43-46页
        2.2.3 目的蛋白ATPase活性的测定第46-47页
        2.2.4 蛋白结晶第47-49页
            2.2.4.1 结晶条件初筛第47-49页
            2.2.4.2 晶体的优化第49页
        2.2.5 晶体的衍射、数据收集及结构解析第49-50页
            2.2.5.1 晶体的衍射及数据的收集处理第49页
            2.2.5.2 结构解析及修正第49-50页
第3章 寨卡病毒解旋酶水解ATP的复合物结构研究第50-62页
    3.1 寨卡病毒解旋酶水解ATP各状态的复合物结构解析第50-56页
        3.1.1 寨卡病毒解旋酶的重组质粒构建第50-51页
        3.1.2 寨卡病毒解旋酶的表达纯化第51-52页
        3.1.3 寨卡病毒解旋酶水解ATP各状态复合物晶体的筛选和优化第52-53页
        3.1.4 寨卡病毒解旋酶复合物的结构解析第53-56页
    3.2 寨卡病毒解旋酶水解中间态复合物的结构分析第56-59页
        3.2.1 寨卡病毒解旋酶水解中间态复合物的整体结构第56-58页
        3.2.2 水解中间态复合物与母体状态、水解激发态复合物的结构比较第58-59页
    3.3 寨卡病毒解旋酶水解终态复合物的结构分析第59-62页
第4章 寨卡病毒解旋酶水解ATP的机制第62-72页
    4.1 寨卡病毒解旋酶水解ATP的活性测定第62页
    4.2 寨卡病毒解旋酶ATP水解循环第62-64页
    4.3 寨卡病毒解旋酶水解ATP关键氨基酸位点的突变分析第64-65页
    4.4 水解ATP机制的保守性研究第65-72页
        4.4.1 与DENV4 解旋酶ATP水解机制的比较第65-68页
        4.4.2 与HCV解旋酶ATP水解机制的比较第68-69页
        4.4.3 与UvrD解旋酶ATP水解机制的比较第69-72页
第5章 研究结论及意义第72-74页
参考文献第74-82页
发表论文和参加科研情况说明第82-84页
致谢第84页

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