| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 细菌二组分体蛋白的极性定位(文献综述) | 第11-21页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 细菌的二组分体 | 第11-12页 |
| 1.3 蛋白极性定位机制 | 第12-14页 |
| 1.4 大肠杆菌中CheA-CheY/CheB二组分体蛋白的极性定位 | 第14-15页 |
| 1.5 新月柄杆菌中二组分体蛋白的动态定位 | 第15-20页 |
| 1.6 结语 | 第20-21页 |
| 第二章 大肠杆菌TorR蛋白对基因表达和DNA复制起始的调控机制 | 第21-83页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-34页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第22-25页 |
| 2.2.2 引物 | 第25-28页 |
| 2.2.3 实验试剂药品来源 | 第28页 |
| 2.2.4 主要仪器与设备 | 第28页 |
| 2.2.5 主要培养基及试剂的配制 | 第28-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-47页 |
| 2.3.1 质粒构建 | 第34-35页 |
| 2.3.2 感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| 2.3.3 转化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 P1转导 | 第37-38页 |
| 2.3.5 细胞倍增时间(doubling time)的测定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 流式细胞仪分析样品制备 | 第39页 |
| 2.3.7 荧光显微镜样品的制备和染色 | 第39-41页 |
| 2.3.8 基因芯片实验 | 第41页 |
| 2.3.9 细菌总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.3.10 总RNA的纯化 | 第42页 |
| 2.3.11 反转录PCR | 第42页 |
| 2.3.12 实时荧光定量PCR | 第42-43页 |
| 2.3.13 定点突变 | 第43页 |
| 2.3.14 删除突变 | 第43-44页 |
| 2.3.15 免疫共沉淀实验 | 第44页 |
| 2.3.16 质谱实验 | 第44页 |
| 2.3.17 细菌双杂交试验 | 第44-45页 |
| 2.3.18 Miller法测定β-半乳糖苷酶活性 | 第45页 |
| 2.3.19 Western blot分析 | 第45-47页 |
| 2.4 实验结果 | 第47-80页 |
| 2.4.1 大肠杆菌二组分体应答蛋白TorR对DNA复制起始的影响 | 第47-55页 |
| 2.4.1.1 ΔtorR和ΔtorS突变菌株的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.4.1.2 torR基因的缺失导致DNA复制起始的提早发生 | 第48-49页 |
| 2.4.1.3 质粒表达的TorR蛋白不能恢复ΔtorR突变表型 | 第49-52页 |
| 2.4.1.4 共同表达TorR和TorS蛋白不能恢复ΔtorR突变表型 | 第52页 |
| 2.4.1.5 sufD和bioD基因缺失导致DNA复制起始延迟 | 第52-53页 |
| 2.4.1.6 SufD蛋白过量表达引起DNA复制起始提早发生 | 第53-55页 |
| 2.4.1.7 ΔtorRΔsufD双突变会引起DNA复制起始延迟 | 第55页 |
| 2.4.2 TorR蛋白对基因表达的调控依赖于细胞周期 | 第55-65页 |
| 2.4.2.1 具有活性的TorR蛋白定位在细胞的旧极 | 第55-57页 |
| 2.4.2.2 旧极定位的TorR蛋白与染色体共定位依赖于细胞周期 | 第57-59页 |
| 2.4.2.3 TorR蛋白对一些基因表达调控依赖于细胞周期 | 第59-64页 |
| 2.4.2.4 TorR对ybjH,fhuB和fepC启动子活性的影响 | 第64-65页 |
| 2.4.3 TorR的旧极定位依赖于MreB和DnaK蛋白 | 第65-80页 |
| 2.4.3.1 GFP-Trap免疫共沉淀技术捕获与TorR-GFP相互作用蛋白 | 第65-67页 |
| 2.4.3.2 TorR 旧极定位需要MreB和DnaK,同时需要与它们相互作用 | 第67-71页 |
| 2.4.3.3 可能与TorR相互作用蛋白的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 2.4.3.4 TorR 旧极定位和对基因表达的调控依赖于ATP | 第72-74页 |
| 2.4.3.5 Z环(FtsZ ring)形成是TorR焦点形成的信号 | 第74-76页 |
| 2.4.3.6 TorR与MreB或者DnaK的相互作用对其旧极定位和调控基因表达具有重要作用 | 第76-80页 |
| 2.5 讨论 | 第80-83页 |
| 2.5.1 TorR蛋白可能通过调节sufD基因的表达量来影响DNA复制起始 | 第80页 |
| 2.5.2 TorR蛋白通过与MreB和DnaK相互作用定位在细胞的旧极 | 第80-82页 |
| 2.5.3 细胞周期中确定基因表达时间的空间调控 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第92页 |
