| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 纤维素简介 | 第9-12页 |
| 1.1.1 纤维素的结构特性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 降解纤维素意义 | 第10-11页 |
| 1.1.3 降解纤维素的方法 | 第11-12页 |
| 1.2 纤维素可能的降解机制 | 第12-14页 |
| 1.2.1 纤维素酶协同降解 | 第12-13页 |
| 1.2.2 纤维素降解中的辅助蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 扩张蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 研究意义及内容 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-24页 |
| 2.1.1 菌种 | 第17页 |
| 2.1.2 PCR引物及分子试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.2.1 PCR引物 | 第17页 |
| 2.1.2.2 分子试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 缓冲液 | 第18-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 基本的准备实验 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌E.Coil(DH10B)电转感受态的制备 | 第25页 |
| 2.2.1.2 大肠杆菌E.Coil(DH10B)热转感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 感受态巴斯德毕赤酵母(X-33)的制备 | 第26页 |
| 2.2.2 RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 重组质粒(pPICZαA-EX22)的构建 | 第27-33页 |
| 2.2.4 重组表达菌(pPICZαA-EX22/X-33)的表达 | 第33页 |
| 2.2.5 重组蛋白(EX22)的纯化及WesternBlot检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5.1 蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.2.5.2 Western Blot检测 | 第33-34页 |
| 2.2.6 酶学性质表征及作用机制 | 第34-36页 |
| 2.2.6.1 测定蛋白EX22还原糖生成量 | 第34页 |
| 2.2.6.2 最适协同pH和温度 | 第34-35页 |
| 2.2.6.3 温度稳定性 | 第35页 |
| 2.2.6.4 在最适条件下作用不同的纤维素底物 | 第35页 |
| 2.2.6.5 保水值的测定 | 第35页 |
| 2.2.6.6 通过FT-IR检测官能团变化 | 第35页 |
| 2.2.6.7 通过XRD、显微镜和SEM分别测定底物结晶度和结构变化 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-52页 |
| 3.1 生物信息学 | 第36-38页 |
| 3.1.1 进化树的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.2 功能结构预测 | 第37-38页 |
| 3.2 质粒(PPICZαA-EX22)的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.1 基因片段EX22的扩增 | 第38页 |
| 3.2.2 质粒(PMD-18T-EX22)的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组质粒(pPICZαA-EX22)的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.4 重组质粒(pPICZαA-EX22)导入毕赤酵母及鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 表达、纯化及Western-Blot检测 | 第41-43页 |
| 3.3.1 重组菌(pPICZαA-EX22/X-33)表达 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组蛋白(EX22)纯化及Western-Blot | 第42-43页 |
| 3.4 酶学性质研究表征 | 第43-52页 |
| 3.4.1 测定蛋白EX22还原糖生成量 | 第43-44页 |
| 3.4.2 最适协同pH和温度 | 第44-45页 |
| 3.4.3 温度稳定性 | 第45-46页 |
| 3.4.4 最适底物 | 第46页 |
| 3.4.5 保水值测定 | 第46-47页 |
| 3.4.6 傅立叶红外色谱检测氢键变化 | 第47-48页 |
| 3.4.7 X-射线衍射检测结晶度变化 | 第48页 |
| 3.4.8 Leica显微镜观察纤维丝直径变化 | 第48-49页 |
| 3.4.9 SEM检测纤维素表面变化 | 第49-52页 |
| 第四章 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
