| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 脱落酸(ABA) | 第13-16页 |
| 1.1 脱落酸(ABA)的合成 | 第13页 |
| 1.2 脱落酸(ABA)的作用 | 第13-14页 |
| 1.3 脱落酸(ABA)信号转导 | 第14-15页 |
| 1.4 ABA信号通路中的第二信使 | 第15-16页 |
| 2 植物信号转导过程中的Ca~(2+)及相关蛋白 | 第16页 |
| 3 活性氧 | 第16-19页 |
| 3.1 活性氧的产生 | 第17-18页 |
| 3.2 活性氧的清除机制 | 第18-19页 |
| 4 过氧化物酶 | 第19-20页 |
| 4.1 过氧化物酶的分类 | 第19-20页 |
| 4.2 过氧化物酶的功能 | 第20页 |
| 5 prx蛋白家族 | 第20-22页 |
| 5.1 prx蛋白的功能概述 | 第20-21页 |
| 5.2 prx蛋白的结构特征 | 第21-22页 |
| 5.3 prx蛋白和Ca~(2+)的关系 | 第22页 |
| 6 OsDMI3 | 第22-23页 |
| 7 本研究的目与内容 | 第23-25页 |
| 第二章 Osprx20与OsDMI3互作的验证 | 第25-47页 |
| 1 实验材料 | 第25-28页 |
| 1.1 植物材料、菌株以及耗材 | 第25-26页 |
| 1.2 实验所需相关试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 实验所用主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2 载体构建 | 第28-32页 |
| 2.1 引物设计合成及测序 | 第28页 |
| 2.2 水稻总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.3 以水稻总RNA为底物合成cDNA | 第29-30页 |
| 2.4 利用PCR原理进行目的基因片段的克隆以及目的片段的回收 | 第30-31页 |
| 2.5 目的片段与载体的连接 | 第31页 |
| 2.6 转化E.coli DH5 α | 第31页 |
| 2.7 载体构建过程中阳性克隆质粒的小量提取 | 第31-32页 |
| 3 实验过程方法以及步骤 | 第32-38页 |
| 3.1 高纯度质粒的提取及纯化 | 第32-33页 |
| 3.2 水稻原生质体提取方法 | 第33-34页 |
| 3.3 原生质体转化法(PEG4000转化法) | 第34页 |
| 3.4 双分子荧光互补验证两目的蛋白之间的相互作用 | 第34-35页 |
| 3.5 融合蛋白的表达 | 第35页 |
| 3.6 原核蛋白的纯化 | 第35页 |
| 3.7 GST-pull down检验相应蛋白体外互作 | 第35-36页 |
| 3.8 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP) | 第36-37页 |
| 3.9 Western blotting检测目的蛋白存在 | 第37页 |
| 3.10 凝胶激酶活性分析 | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-46页 |
| 4.1 用双分子荧光互补验证OsDMI3与Osprx20的相互作用 | 第38-39页 |
| 4.2 GST-pull down验证Osprx20与OsDMI3原核表达蛋白体外互作 | 第39-43页 |
| 4.3 利用Co-IP技术体内验证OsDMI3和Osprx20互作 | 第43-45页 |
| 4.4 OsDMI3体外磷酸化Osprx20 | 第45-46页 |
| 5 本章小结与讨论 | 第46-47页 |
| 第三章 Osprx20在ABA信号途径中的作用分析 | 第47-65页 |
| 1 实验材料 | 第47-49页 |
| 1.1 实验植物材料 | 第47页 |
| 1.2 实验所需相关试剂 | 第47-48页 |
| 1.3 实验所用主要仪器 | 第48页 |
| 1.4 实验所用载体构建 | 第48-49页 |
| 2 实验方法步骤 | 第49-54页 |
| 2.1 水稻总RNA的提取 | 第49页 |
| 2.2 以水稻总RNA提取物为底物合成cDNA | 第49页 |
| 2.3 定量引物的设计 | 第49页 |
| 2.4 水稻幼苗的ABA处理 | 第49-50页 |
| 2.5 水稻幼苗的H202处理 | 第50页 |
| 2.6 荧光定量PCR分析基因的表达量变化 | 第50页 |
| 2.7 转化原生质体质粒蛋白的过表达培养 | 第50页 |
| 2.8 水稻原生质中内源表达的H_2O_2染色 | 第50-51页 |
| 2.9 原生质体H_2O_2含量定量的测定 | 第51页 |
| 2.10 原核表达蛋白还原H_2O_2动态变化 | 第51-52页 |
| 2.11 激光共聚焦显微镜检测H_2O_2的水平变化 | 第52页 |
| 2.12 酵母感受态的制备 | 第52-53页 |
| 2.13 诱饵载体转化入酵母感受态细胞 | 第53页 |
| 2.14 酵母细胞的共融合及培养 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-63页 |
| 3.1 植物叶片总RNA的提取以及检测 | 第54页 |
| 3.2 外源ABA处理诱导水稻中Osprx20表达上调 | 第54-55页 |
| 3.3 外源H_2O_2处理诱导水稻中Osprx20表达上调 | 第55-56页 |
| 3.4 OsDMI3调控ABA诱导的Osprx20基因表达 | 第56-57页 |
| 3.5 原核表达Osprx20体外能还原H_2O_2 | 第57页 |
| 3.6 过表达Osprx20可以降低ABA诱导的H_2O_2含量 | 第57-58页 |
| 3.7 酵母双杂交方法验证Osprx20同源蛋白Osprx22不与OsDMI3产生互作 | 第58-63页 |
| 4 结果与讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 全文总结 | 第65-67页 |
| 1 全文小结 | 第65页 |
| 2 全文讨论 | 第65页 |
| 3 本文存在问题 | 第65-66页 |
| 4 本文创新之处 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
