| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 上篇 文献综述 | 第14-31页 |
| 1. 香蕉概述 | 第14-18页 |
| 1.1. 香蕉的分类及植物学特性 | 第14-15页 |
| 1.2. 香蕉果实生长发育的生理学特性 | 第15-16页 |
| 1.3. 香蕉果实的成分和营养价值 | 第16-17页 |
| 1.4. 香蕉产业简述及其经济价值 | 第17-18页 |
| 2. 淀粉研究概述 | 第18-22页 |
| 2.1. 淀粉简述 | 第18-19页 |
| 2.2. 淀粉的结构及组成 | 第19页 |
| 2.3. 淀粉的生物合成 | 第19-22页 |
| 3. 直链淀粉概述 | 第22-25页 |
| 3.1. 直链淀粉的生物合成 | 第22页 |
| 3.2. 颗粒结合型淀粉合成酶研究进展 | 第22-24页 |
| 3.2.1. 颗粒结合型淀粉合成酶的种类 | 第23页 |
| 3.2.2. 颗粒结合型淀粉合成酶基因的序列特征 | 第23-24页 |
| 3.2.3. 颗粒结合型淀粉合成酶基因的研究进展 | 第24页 |
| 3.3. 直链淀粉的应用 | 第24-25页 |
| 4. 启动子概述 | 第25-28页 |
| 4.1. 启动子简介 | 第25-26页 |
| 4.2. 淀粉合成酶基因启动子研究进展 | 第26-28页 |
| 4.2.1. ADP-葡萄糖焦磷酸化酶基因启动子 | 第26-27页 |
| 4.2.2. 可溶性淀粉合成酶基因启动子 | 第27页 |
| 4.2.3. 颗粒结合型淀粉合成酶基因启动子 | 第27-28页 |
| 4.2.4. 淀粉分支酶基因启动子 | 第28页 |
| 5. 香蕉果实淀粉研究进展 | 第28-29页 |
| 6. 本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| 7. 技术路线 | 第30-31页 |
| 下篇 研究内容 | 第31-105页 |
| 1. 实验材料 | 第31-33页 |
| 1.1. 实验材料、试剂和仪器 | 第31-33页 |
| 1.1.1. 实验材料 | 第31页 |
| 1.1.2. 实验试剂 | 第31-32页 |
| 1.1.3. 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2. 实验方法 | 第33-60页 |
| 2.1. 实验材料处理 | 第33页 |
| 2.2. 香蕉果实总RNA提取及反转录cDNA合成 | 第33-35页 |
| 2.2.1. 香蕉果实总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2. RNA完整性、纯度及浓度检测 | 第34-35页 |
| 2.2.3. 反转录cDNA合成 | 第35页 |
| 2.3. 香蕉果实MaGBSSI-3基因克隆 | 第35-38页 |
| 2.3.1. 香蕉果实MaGBSSI-3基因PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.2. 扩增目的片段回收及检测 | 第36-37页 |
| 2.3.3. 目的片段T载体连接 | 第37页 |
| 2.3.4. 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第37-38页 |
| 2.3.5. 重组转化子菌株PCR筛选 | 第38页 |
| 2.4. 香蕉果实MaGBSSI-3基因生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 2.5. 植物重组表达载体pCAMBIA-1302-MaGBSSI-3构建 | 第39-40页 |
| 2.5.1. 阳性菌落质粒DNA提取 | 第39页 |
| 2.5.2. 目的片段及表达空载体质粒DNA双酶切 | 第39-40页 |
| 2.5.3. 重组表达载体pCAMBIA-1302-MaGBSSI-3连接 | 第40页 |
| 2.5.4. 重组表达载体转化大肠杆菌及重组转化子筛选 | 第40页 |
| 2.6. 烟草叶片原生质体亚细胞定位 | 第40-42页 |
| 2.7. MaGBSSI-3基因在香蕉中的表达分析 | 第42页 |
| 2.8. 重组植物表达载体构建及农杆菌介导转化番茄 | 第42-44页 |
| 2.8.1. 重组植物表达载体pCAMBIA-1302-MaGBSSI-3构建 | 第42页 |
| 2.8.2. 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞制备 | 第42-43页 |
| 2.8.3. 重组植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第43页 |
| 2.8.4. 根癌农杆菌介导番茄遗传转化 | 第43-44页 |
| 2.9. 番茄基因组DNA小量提取及阳性转化植株检测 | 第44-45页 |
| 2.9.1. 番茄基因组DNA小量提取 | 第44-45页 |
| 2.9.2. 阳性转化植株PCR检测 | 第45页 |
| 2.10. 番茄基因组DNA大量提取(改良CTAB法) | 第45-46页 |
| 2.11. 转化番茄株系Southern-bloting鉴定 | 第46-49页 |
| 2.11.1. 阳性对照质粒DNA提取 | 第46页 |
| 2.11.2. 探针标记 | 第46-47页 |
| 2.11.3. 基因组DNA酶切 | 第47页 |
| 2.11.4. 酶切产物琼脂糖凝胶电泳 | 第47-48页 |
| 2.11.5. Southern转膜 | 第48页 |
| 2.11.6. Southern杂交 | 第48页 |
| 2.11.7. Southern检测 | 第48-49页 |
| 2.12. MaGBSSI-3基因在番茄中的表达分析 | 第49页 |
| 2.13. 不同发育阶段番茄果实GBSS酶活性测定 | 第49页 |
| 2.14. 番茄淀粉含量测定 | 第49-50页 |
| 2.14.1. 总淀粉含量测定 | 第50页 |
| 2.14.2. 直链淀粉含量测定 | 第50页 |
| 2.14.3. 支链淀粉含量测定 | 第50页 |
| 2.15. 不同发育时期番茄果实淀粉颗粒形态观察 | 第50页 |
| 2.16. MaGBSSI-3基因在番茄中表达位点的确定 | 第50-51页 |
| 2.17. 酵母重组表达载体构建及转化 | 第51-53页 |
| 2.17.1. 酵母重组表达载体pPICZα A- MaGBSSI-3构建 | 第51页 |
| 2.17.2. 毕赤酵母感受态细胞制备 | 第51页 |
| 2.17.3. 酵母重组表达载体线性化及去磷酸化 | 第51-52页 |
| 2.17.4. 重组表达载体转化酵母感受态细胞 | 第52-53页 |
| 2.18. 多拷贝转化子筛选及甲醇诱导表达 | 第53页 |
| 2.19. 诱导产物SDS-PAGE电泳检测 | 第53-54页 |
| 2.20. 诱导蛋白纯化、浓缩及浓度测定 | 第54-56页 |
| 2.20.1. 诱导蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 2.20.2. 诱导蛋白浓缩 | 第55页 |
| 2.20.3. 诱导蛋白浓度测定 | 第55-56页 |
| 2.21. 诱导蛋白酶活性测定 | 第56页 |
| 2.22. MaGBSSI-3基因启动子克隆及生物信息学分析 | 第56-57页 |
| 2.22.1. MaGBSSI-3基因启动子克隆 | 第56-57页 |
| 2.22.2. MaGBSSI-3基因启动子生物信息学分析 | 第57页 |
| 2.23. MaGBSSI-3基因启动子5'端缺失及瞬时表达载体构建 | 第57-58页 |
| 2.24. MaGBSSI-3基因启动子重组表达载体基因枪转化及瞬时表达 | 第58-59页 |
| 2.25. MaGBSSI-3基因启动子关键相应元件调控分析 | 第59-60页 |
| 3. 结果与分析 | 第60-98页 |
| 3.1. 香蕉果实MaGBSSI-3基因的克隆 | 第60页 |
| 3.2. 香蕉果实MaGBSSI-3基因生物信息学分析 | 第60-68页 |
| 3.2.1. MaGBSSI-3基因序列组成及特征分析 | 第60-61页 |
| 3.2.2. MaGBSSI-3基因聚类分析 | 第61-62页 |
| 3.2.3. MaGBSSI-3基因香蕉染色体定位分析 | 第62-63页 |
| 3.2.4. MaGBSSI-3基因ORF预测分析 | 第63-64页 |
| 3.2.5. MaGBSSI-3基因酶切图谱预测分析 | 第64-65页 |
| 3.2.6. MaGBSSI-3基因编码蛋白理化性质预测分析 | 第65-66页 |
| 3.2.7. MaGBSSI-3基因编码蛋白二级结构预测分析 | 第66页 |
| 3.2.8. MaGBSSI-3基因编码蛋白三级结构预测分析 | 第66-67页 |
| 3.2.9. MaGBSSI-3基因编码蛋白磷酸化位点预测分析 | 第67页 |
| 3.2.10. MaGBSSI-3基因编码蛋白跨膜结构预测分析 | 第67页 |
| 3.2.11. MaGBSSI-3基因编码蛋白亲水性与疏水性预测分析 | 第67-68页 |
| 3.2.12. MaGBSSI-3基因编码蛋白亚细胞定位预测分析 | 第68页 |
| 3.3. 植物重组表达载体构建及MaGBSSI-3亚细胞定位 | 第68-70页 |
| 3.3.1. 植物重组表达载体pCAMBIA-1302-MaGBSSI-3构建 | 第68-69页 |
| 3.3.2. MaGBSSI-3基因亚细胞定位 | 第69-70页 |
| 3.4. MaGBSSI-3基因在香蕉中的表达分析 | 第70页 |
| 3.5. MaGBSSI-3基因转化番茄 | 第70-71页 |
| 3.6. 转化MaGBSSI-3基因番茄分子检测 | 第71-72页 |
| 3.6.1. 转化MaGBSSI-3基因番茄PCR检测 | 第71-72页 |
| 3.6.2. 转化MaGBSSI-3基因番茄Southern-blot检测 | 第72页 |
| 3.7. MaGBSSI-3基因在番茄中的表达分析 | 第72-75页 |
| 3.7.1. 番茄总RNA提取及反转录cDNA合成 | 第73-74页 |
| 3.7.2. MaGBSSI-3基因在番茄果实不同发育时期的表达分析 | 第74-75页 |
| 3.7.3. MaGBSSI-3基因在番茄不同组织中的表达分析 | 第75页 |
| 3.8. 番茄果实不同发育时期GBSS酶活性及淀粉含量测定 | 第75-81页 |
| 3.8.1. 番茄果实不同发育时期GBSS酶活性测定 | 第75-76页 |
| 3.8.2. 番茄果实不同发育时期淀粉颗粒观察 | 第76-77页 |
| 3.8.3. 番茄果实不同发育时期直链淀粉含量测定 | 第77-78页 |
| 3.8.4. 番茄果实不同发育时期支链淀粉含量测定 | 第78-79页 |
| 3.8.5. 番茄果实不同发育时期总淀粉含量测定 | 第79-80页 |
| 3.8.6. 番茄不同组织中直链淀粉含量测定 | 第80页 |
| 3.8.7. 番茄不同组织中支链淀粉含量测定 | 第80页 |
| 3.8.8. 番茄不同组织中总淀粉含量测定 | 第80-81页 |
| 3.9. MaGBSSI-3基因在转基因番茄中表达位点的确定 | 第81页 |
| 3.10. 酵母重组表达载体构建及多拷贝转化子筛选 | 第81-83页 |
| 3.10.1. 酵母重组表达载体pPICZα A-MaGBSSI-3构建 | 第81-83页 |
| 3.10.2. 多拷贝转化子筛选 | 第83页 |
| 3.11. 甲醇诱导表达产物SDS-PAGE检测 | 第83-84页 |
| 3.12. 甲醇诱导蛋白浓度及GBSS酶活性测定 | 第84-85页 |
| 3.12.1. 甲醇诱导蛋白浓度测定 | 第84-85页 |
| 3.12.2. 甲醇诱导目的蛋白GBSS酶活性测定 | 第85页 |
| 3.13. MaGBSSI-3基因启动子克隆及生物信息学分析 | 第85-92页 |
| 3.13.1. MaGBSSI-3基因启动子克隆 | 第85-86页 |
| 3.13.2. MaGBSSI-3基因启动子生物信息学分析 | 第86-92页 |
| 3.14. MaGBSSI-3基因启动子5'端缺失分析 | 第92-94页 |
| 3.14.1. MaGBSSI-3基因启动子5'端缺失片段克隆 | 第92页 |
| 3.14.2. 启动子缺失片段重组表达载体构建 | 第92-93页 |
| 3.14.3. 基因枪转化瞬时表达 | 第93-94页 |
| 3.15. MaGBSSI-3基因启动子关键响应元件调控分析及淀粉含量测定 | 第94-98页 |
| 3.15.1. 不同调控因子处理后的香蕉果实MaGBSSI-3基因表达分析 | 第94-95页 |
| 3.15.2. 不同调控因子处理后的香蕉果实GBSS酶活性测定 | 第95-96页 |
| 3.15.3. 不同调控因子处理后的香蕉果实淀粉颗粒观察 | 第96页 |
| 3.15.4. 不同调控因子处理后的香蕉果实直链淀粉含量测定 | 第96-97页 |
| 3.15.5. 不同调控因子处理后的香蕉果实支链淀粉含量测定 | 第97页 |
| 3.15.6. 不同调控因子处理后的香蕉果实总淀粉含量测定 | 第97-98页 |
| 4. 讨论 | 第98-104页 |
| 4.1. 香蕉果实MaGBSSI-3基因生物信息学分析及亚细胞定位 | 第98-99页 |
| 4.2. 香蕉果实MaGBSSI-3基因转化番茄及Southern-bloting检测 | 第99页 |
| 4.3. 香蕉果实MaGBSSI-3基因在番茄中的功能验证 | 第99-102页 |
| 4.3.1. MaGBSSI-3基因在番茄果实不同发育时期的表达分析 | 第99-100页 |
| 4.3.2. MaGBSSI-3基因在番茄不同组织中的表达分析 | 第100页 |
| 4.3.3. 番茄果实不同发育时期GBSS酶活性分析 | 第100页 |
| 4.3.4. 番茄果实不同发育时期淀粉颗粒观察 | 第100-101页 |
| 4.3.5. 番茄果实不同发育时期淀粉含量测定 | 第101页 |
| 4.3.6. 番茄不同组织中淀粉含量测定 | 第101页 |
| 4.3.7. MaGBSSI-3基因在番茄中表达位点的确定 | 第101-102页 |
| 4.4. MaGBSSI-3基因在酵母中的诱导表达及功能验证 | 第102页 |
| 4.5. MaGBSSI-3基因启动子克隆及关键响应元件调控分析 | 第102-104页 |
| 5. 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-119页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第119-121页 |
| 附录(Appendix) | 第121-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
