| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 β_2微球蛋白与疾病 | 第10-13页 |
| 1.1.1 β_2微球蛋白的简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 β_2微球蛋白与相关疾病 | 第11页 |
| 1.1.3 透析相关淀粉样病变的血液净化治疗 | 第11-12页 |
| 1.1.4 β_2微球蛋白在临床上的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 纳米抗体技术 | 第13-16页 |
| 1.2.1 纳米抗体的简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 纳米抗体结构特点及生物化学性质 | 第14-15页 |
| 1.2.3 纳米抗体的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 融合标签技术 | 第16-18页 |
| 1.3.1 融合标签技术简介 | 第16页 |
| 1.3.2 融合标签的种类 | 第16-17页 |
| 1.3.3 融合标签技术的应用 | 第17页 |
| 1.3.4 融合标签技术的移除策略 | 第17-18页 |
| 1.4 包涵体的复性 | 第18-21页 |
| 1.4.1 包涵体的概述 | 第18-19页 |
| 1.4.2 包涵体复性及影响因素 | 第19-20页 |
| 1.4.3 包涵体复性的常用方法 | 第20-21页 |
| 1.5 本论文研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 抗β_2微球蛋白纳米抗体83F的融合表达 | 第22-58页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.2.1 实验材料及仪器 | 第23-26页 |
| 2.2.2 主要仪器及耗材 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 六种纳米抗体重组表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.2 重组质粒转化表达菌株 | 第30-31页 |
| 2.3.3 重组蛋白83F的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.3.4 重组蛋白83F的可溶性检测 | 第32页 |
| 2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.3.6 金属离子螯合层析 | 第33-34页 |
| 2.3.7 纳米抗体83F蛋白纯度的分析及回收率的计算 | 第34-36页 |
| 2.3.8 ELISA法检测抗β_2M纳米抗体83F的抗原结合活性 | 第36页 |
| 2.3.9 SPR测定抗β_2M纳米抗体83F的亲和力 | 第36-37页 |
| 2.3.10 抗β_2M纳米抗体83F融合标签的切除 | 第37-38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-56页 |
| 2.4.1 纳米抗体83F融合表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 2.4.2 纳米抗体83F的表达 | 第41-49页 |
| 2.4.3 纳米抗体83F的纯化及纯度分析 | 第49-52页 |
| 2.4.4 纳米抗体83F的活性检测 | 第52-54页 |
| 2.4.5 纳米抗体83F融合标签的切除 | 第54-56页 |
| 2.4.6 SPR检测切除标签后纳米抗体83F的亲和力 | 第56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 3 抗β_2微球蛋白纳米抗体83F的包涵体复性 | 第58-85页 |
| 3.1 引言 | 第58-59页 |
| 3.2 实验材料 | 第59-61页 |
| 3.2.1 材料及试剂 | 第59-60页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-66页 |
| 3.3.1 包涵体的收集、初步纯化及变性 | 第61页 |
| 3.3.2 金属离子螯合层析 | 第61-62页 |
| 3.3.3 重组蛋白的稀释复性及优化 | 第62-63页 |
| 3.3.4 蛋白纯度的分析及蛋白回收率的计算 | 第63-65页 |
| 3.3.5 复性后蛋白抗原结合活性的ELISA检测 | 第65页 |
| 3.3.6 SPR测定抗β_2M纳米抗体的亲和力 | 第65页 |
| 3.3.7 圆二色测定抗β_2M纳米抗体的二级结构 | 第65-66页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第66-84页 |
| 3.4.1 纳米抗体83F包涵体的纯化 | 第66-69页 |
| 3.4.2 纳米抗体83F包涵体复性条件优化 | 第69-83页 |
| 3.4.3 SPR测定复性后纳米抗体83F的亲和力 | 第83-84页 |
| 3.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录A 抗β_2M纳米抗体基因序列信息 | 第91-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
