| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 香菇概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 香菇的分类与特征 | 第10页 |
| 1.1.2 香菇食用与药用价值 | 第10页 |
| 1.1.3 香菇的生长发育过程 | 第10-11页 |
| 1.1.4 香菇栽培技术概述 | 第11-12页 |
| 1.2 透明颤菌血红蛋白基因(vgb)概述 | 第12-13页 |
| 1.2.1 透明颤菌血红蛋白的特点 | 第12页 |
| 1.2.2 vgb基因的应用 | 第12-13页 |
| 1.2.3 vgb基因在香菇中应用的可能性 | 第13页 |
| 1.3 食用菌遗传转化技术 | 第13-16页 |
| 1.3.1 聚乙二醇(PEG)介导转化法 | 第13-14页 |
| 1.3.2 电击转化法 | 第14页 |
| 1.3.3 限制性酶切转化法 | 第14-15页 |
| 1.3.4 基因枪转化法 | 第15页 |
| 1.3.5 脂质体介导转化法 | 第15-16页 |
| 1.3.6 农杆菌介导转化法 | 第16页 |
| 1.4 筛选标记和启动子的选择 | 第16-17页 |
| 1.5 透明颤菌血红蛋白的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.6 香菇中几种主要胞外酶的作用 | 第18页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 1.8 实验技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 pBHg-vgb-gpd重组质粒的构建 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 vgb基因的合成 | 第21页 |
| 2.2.3 pBHg-BCA1-gpd质粒的双酶切 | 第21-23页 |
| 2.2.4 vgb基因片段与pBHg-gpd载体的连接及转化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 阳性转化子重组质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.6 重组质粒pBHg-vgb-gpd的酶切验证 | 第25页 |
| 2.2.7 pBHg-vgb-gpd重组质粒的PCR验证 | 第25-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.3.1 vgb基因的合成结果 | 第26页 |
| 2.3.2 pBHg-BCA1-gpd质粒的双酶切 | 第26-27页 |
| 2.3.3 重组质粒阳性转化子的筛选 | 第27页 |
| 2.3.4 pBHg-vgb-gpd重组质粒酶切验证 | 第27-29页 |
| 2.3.5 pBHg-vgb-gpd重组质粒的PCR验证 | 第29-30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 香菇L26vgb基因转化菌株的构建 | 第31-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 培养基 | 第31-32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 香菇L26对潮霉素的耐受浓度筛选 | 第32页 |
| 3.2.2 农杆菌EHA105对头孢噻肟霉素的抗性实验 | 第32-33页 |
| 3.2.3 香菇L26对头孢噻肟霉素的抗性实验 | 第33页 |
| 3.2.4 冻融法转化农杆菌EHA105 | 第33页 |
| 3.2.5 农杆菌阳性转化子的筛选 | 第33-34页 |
| 3.2.6 农杆菌介导法转化香菇L26 | 第34-35页 |
| 3.2.7 香菇转化子的筛选 | 第35页 |
| 3.2.8 香菇转化子的PCR验证 | 第35页 |
| 3.2.9 原生质体纯化转基因菌株 | 第35-36页 |
| 3.2.10 原生质体纯化菌株的PCR验证 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.3.1 香菇L26菌丝的耐受潮霉素浓度筛选 | 第36-37页 |
| 3.3.2 头孢噻肟霉素对农杆菌EHA105的抗性实验 | 第37-38页 |
| 3.3.3 头孢噻肟霉素对香菇L26的抗性实验 | 第38-39页 |
| 3.3.4 香菇转化子的筛选 | 第39-40页 |
| 3.3.5 转化子的vgb基因扩增 | 第40页 |
| 3.3.6 转化子潮霉素基因的扩增 | 第40-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第四章 转化子的表达验证和生理特性分析 | 第42-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.1.1 培养基 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-50页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第42-43页 |
| 4.2.2 转基因菌株中血红蛋白基因的表达量分析 | 第43-45页 |
| 4.2.2.1 总RNA的提取 | 第43页 |
| 4.2.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第43-44页 |
| 4.2.2.3 vgb基因qPCR分析 | 第44-45页 |
| 4.2.2.4 vgb基因的RT-PCR分析 | 第45页 |
| 4.2.3 血红蛋白表达情况分析 | 第45-46页 |
| 4.2.4 转化子中香菇多糖产量的检测 | 第46-47页 |
| 4.2.4.1 标准曲线的制备 | 第46页 |
| 4.2.4.2 多糖的提取及纯化 | 第46页 |
| 4.2.4.3 多糖含量测定 | 第46-47页 |
| 4.2.5 转化子菌丝在培养皿中的生长情况分析 | 第47页 |
| 4.2.6 袋栽和大试管栽培实验 | 第47页 |
| 4.2.7 酶活力测定 | 第47-50页 |
| 4.2.7.1 试剂的配制 | 第47-48页 |
| 4.2.7.2 纤维素酶活力测定 | 第48-49页 |
| 4.2.7.3 漆酶活力测定 | 第49页 |
| 4.2.7.4 淀粉酶活力测定 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与分析 | 第50-59页 |
| 4.3.1 转化子总RNA的提取结果 | 第50-51页 |
| 4.3.2 转化子qPCR结果 | 第51-52页 |
| 4.3.3 转化子的RT-PCR结果 | 第52-53页 |
| 4.3.4 血红蛋白的表达分析结果 | 第53页 |
| 4.3.5 多糖产量检测结果 | 第53-54页 |
| 4.3.6 转化子菌丝在培养皿中的生长情况分析 | 第54-55页 |
| 4.3.7 袋栽和大试管栽培实验结果 | 第55-57页 |
| 4.3.8 酶活力测定结果 | 第57-59页 |
| 4.2.8.1 羧甲基纤维素酶活力测定结果 | 第57-58页 |
| 4.2.8.2 漆酶活力测定结果 | 第58页 |
| 4.2.8.3 淀粉酶活力测定结果 | 第58-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 全文总结与讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| Abstract | 第67-68页 |
