| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 果胶质 | 第13-15页 |
| 1.2 果胶酶 | 第15-20页 |
| 1.2.1 果胶酶的分类与结构 | 第15-17页 |
| 1.2.2 果胶酶的表达与性质 | 第17-19页 |
| 1.2.3 碱性果胶酶的应用领域 | 第19-20页 |
| 1.3 毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统的优点 | 第20-21页 |
| 1.3.2 毕赤酵母高效表达外源蛋白策略 | 第21-23页 |
| 1.4 本课题的研究意义和主要研究内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 本课题的研究意义 | 第23页 |
| 1.4.2 本课题的主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 芽孢杆菌果胶裂解酶Pel-s在P.pastoris中的高效表达及酶学性质分析 | 第25-63页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第25-29页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.2.3 分子实验试剂及化学试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.5 实验溶液 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-49页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第29-30页 |
| 2.3.2 菌株保存方法 | 第30页 |
| 2.3.3 重组载体pHKA/pel-s的构建 | 第30-36页 |
| 2.3.4 多拷贝重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| 2.3.5 重组毕赤酵母菌株G/pel-s的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.6 目的基因拷贝数的鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.7 重组毕赤酵母菌株G/pel-s的诱导发酵 | 第43-44页 |
| 2.3.8 果胶裂解酶Pel-s酶活测定 | 第44-45页 |
| 2.3.9 SDS-PAGE分析及蛋白浓度测定 | 第45-47页 |
| 2.3.10 重组酶Pel-s的纯化及酶学性质分析 | 第47-49页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第49-61页 |
| 2.4.1 重组载体pHKA/pel-s的构建 | 第49页 |
| 2.4.2 重组毕赤酵母菌株GS115/pel-s的构建及发酵产酶分析 | 第49-50页 |
| 2.4.3 SDS-PAGE分析 | 第50-51页 |
| 2.4.4 重组Pel-s的酶学性质分析 | 第51-54页 |
| 2.4.5 多拷贝重组毕赤酵母菌株的构建 | 第54-55页 |
| 2.4.6 分泌型重组毕赤酵母的拷贝数鉴定 | 第55-58页 |
| 2.4.7 多拷贝重组酵母发酵产酶分析 | 第58-60页 |
| 2.4.8 蛋白浓度测定 | 第60-61页 |
| 2.5 本章小结 | 第61-63页 |
| 第三章 类芽孢杆菌果胶裂解酶Pel-b在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质分析 | 第63-79页 |
| 3.1 引言 | 第63页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第63-64页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第63页 |
| 3.2.2 菌株与质粒 | 第63-64页 |
| 3.2.3 分子实验试剂及化学试剂 | 第64页 |
| 3.2.4 培养基及溶液 | 第64页 |
| 3.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 3.3.1 菌株培养与保存方法 | 第64页 |
| 3.3.2 重组质粒pHKA/pel-b的构建 | 第64-66页 |
| 3.3.3 重组毕赤酵母菌株G/pel-b的构建和产酶分析 | 第66页 |
| 3.3.4 果胶裂解酶Pel-b酶活测定 | 第66-67页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE分析及蛋白浓度测定 | 第67页 |
| 3.3.6 重组酶Pel-b的酶学性质初步分析 | 第67-68页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第68-77页 |
| 3.4.1 分泌型重组质粒pHKA-pel-b的构建 | 第68-71页 |
| 3.4.2 重组毕赤酵母菌株GS115/pel-b的构建及筛选 | 第71页 |
| 3.4.3 重组毕赤酵母GS115/pel-b的发酵产酶分析 | 第71-73页 |
| 3.4.4 SDS-PAGE分析及蛋白浓度测定 | 第73-74页 |
| 3.4.5 重组果胶裂解酶Pel-b的酶学性质初步分析 | 第74-77页 |
| 3.5 本章小结 | 第77-79页 |
| 结论与展望 | 第79-81页 |
| 结论 | 第79页 |
| 本论文创新点 | 第79-80页 |
| 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附件 | 第90页 |
