| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 L-色氨酸的性质和应用 | 第11-12页 |
| 1.2 L-色氨酸的生产方法 | 第12-13页 |
| 1.3 L-色氨酸的微生物合成机制 | 第13-15页 |
| 1.3.1 L-色氨酸的微生物合成途径 | 第13-14页 |
| 1.3.2 微生物合成L-色氨酸的调控机制 | 第14-15页 |
| 1.4 L-色氨酸合成的代谢调控策略 | 第15-19页 |
| 1.4.1 抗反馈调剂作用酶的筛选 | 第15页 |
| 1.4.2 关键酶表达量的提高 | 第15-16页 |
| 1.4.3 前提物供应量的提高 | 第16页 |
| 1.4.4 分支代谢产物生成的减弱 | 第16-17页 |
| 1.4.5 L-Trp转运途径的改造 | 第17页 |
| 1.4.6 L-Trp降解途径的阻断 | 第17页 |
| 1.4.7 磷酸烯醇丙酮酸-葡萄糖磷酸转移酶系统改造 | 第17-18页 |
| 1.4.8 乙酸合成途径改造 | 第18-19页 |
| 1.5 立题依据及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第19页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 大肠杆菌全局调控蛋白Crp、FruR、FlhD、TyrR的失活对L-Trp合成的影响 | 第21-41页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 培养基和培养条件 | 第23-25页 |
| 2.2.4 分子生物学操作 | 第25-28页 |
| 2.2.5 发酵参数的测定 | 第28页 |
| 2.2.6 代谢组学分析 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-39页 |
| 2.3.1 菌株E.coliFB-04基因组crp、fruR、flhD及tyrR基因缺失菌株的构建 | 第29-31页 |
| 2.3.2 crp、fruR、flhD及tyrR单基因缺失菌株摇瓶发酵 | 第31-34页 |
| 2.3.3 fruR基因敲除对不同碳源组合代谢的影响 | 第34-35页 |
| 2.3.4 菌株E.coliFB-04(ΔfruR)胞内物质主成分分析 | 第35-36页 |
| 2.3.5 菌株E.coliFB-04(ΔfruR)代谢流分析 | 第36-38页 |
| 2.3.6 菌株E.coliFB-04(ΔfruR)3L发酵罐分批补料发酵 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 大肠杆菌携运蛋白Hpr突变弱化磷酸烯醇式丙酮酸?葡萄糖磷酸转移酶系统提高糖转化率 | 第41-55页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 材料与方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.2.2 试剂和仪器 | 第41页 |
| 3.2.3 培养基与培养方法 | 第41-42页 |
| 3.2.4 分子生物学操作 | 第42-44页 |
| 3.2.5 发酵参数的测定 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-53页 |
| 3.3.1 质粒pMD-SK的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 ptsH基因缺失菌株E.coliFB-04(ΔptsH)的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.3 菌株E.coliFB-04(ΔptsH)摇瓶发酵 | 第47页 |
| 3.3.4 基因ptsH编码蛋白(Hpr)的定点突变 | 第47-49页 |
| 3.3.5 不同ptsH突变基因对基因组原始基因的替换 | 第49-50页 |
| 3.3.6 菌株E.coliFB-04(ptsHN12S),FB-04(ptsHN12A),FB-04(ptsHS46A),FB-04(ptsHS46N)摇瓶发酵 | 第50-51页 |
| 3.3.7 菌株E.coliFB-04(ptsHN12S),FB-04(ptsHN12A),FB-04(ptsHS46A)3L发酵罐分批补料发酵 | 第51-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 第四章 大肠杆菌乙酸主要合成途径的阻断减弱乙酸形成 | 第55-67页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料与方法 | 第55-57页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第55页 |
| 4.2.3 培养基和培养方法 | 第55-56页 |
| 4.2.4 分子生物学操作 | 第56-57页 |
| 4.2.5 发酵参数的测定 | 第57页 |
| 4.2.6 代谢组学分析 | 第57页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第57-65页 |
| 4.3.1 pta基因敲除菌E.coliFB-04(Δpta)的构建 | 第57-59页 |
| 4.3.2 ackA基因敲除菌E.coliFB-04(ΔackA)的构建 | 第59-60页 |
| 4.3.3 菌株E.coliFB-04(Δpta)和FB-04(ΔackA)摇瓶发酵 | 第60-61页 |
| 4.3.4 菌株E.coliFB-04(Δpta)和FB-04(ΔackA)3L发酵罐分批补料发酵 | 第61-63页 |
| 4.3.5 菌株E.coliFB-04(Δpta)胞内物质主成分分析 | 第63-64页 |
| 4.3.6 菌株E.coliFB-04(Δpta)代谢流分析 | 第64-65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 大肠杆菌磷酸乙酰基转移酶突变体的发现及鉴定 | 第67-77页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 材料与方法 | 第67-70页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第67页 |
| 5.2.2 试剂和仪器 | 第67页 |
| 5.2.3 培养基和培养方法 | 第67-68页 |
| 5.2.4 分子生物学操作 | 第68-69页 |
| 5.2.5 重组蛋白的分离纯化 | 第69-70页 |
| 5.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第70页 |
| 5.2.7 酶活测定 | 第70页 |
| 5.2.8 圆二色谱检测 | 第70页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第70-76页 |
| 5.3.1 Pta突变体(Pta1)的发现 | 第70-71页 |
| 5.3.2 野生酶Pta及其突变体Pta1的克隆 | 第71-72页 |
| 5.3.3 野生酶Pta及其突变体Pta1的表达 | 第72-73页 |
| 5.3.4 野生酶Pta及其突变体Pta1的纯化 | 第73-74页 |
| 5.3.5 野生酶Pta及其突变体Pta1的酶学性质分析 | 第74页 |
| 5.3.6 野生酶Pta三维结构模拟 | 第74-75页 |
| 5.3.7 野生酶Pta及其突变体Pta1圆二色谱分析 | 第75-76页 |
| 5.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 第六章 大肠杆菌乙酸主要合成途径弱化降低乙酸形成及提高L-Trp合成 | 第77-87页 |
| 6.1 引言 | 第77页 |
| 6.2 材料与方法 | 第77-79页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第77-78页 |
| 6.2.2 试剂和仪器 | 第78页 |
| 6.2.3 培养基和培养方法 | 第78页 |
| 6.2.4 分子生物学操作 | 第78-79页 |
| 6.2.5 发酵参数的测定 | 第79页 |
| 6.2.6 代谢组学分析 | 第79页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第79-86页 |
| 6.3.1 菌株E.coliFB-04(pta1)的构建 | 第79-81页 |
| 6.3.2 菌株E.coliFB-04(pta1)摇瓶发酵 | 第81-82页 |
| 6.3.3 菌株E.coliFB-04(pta1)3L发酵罐分批补料发酵 | 第82-83页 |
| 6.3.4 菌株E.coliFB-04(pta1)胞内物质主成分分析 | 第83-84页 |
| 6.3.5 菌株E.coliFB-04(pta1)代谢流分析 | 第84-86页 |
| 6.4 本章小结 | 第86-87页 |
| 第七章 大肠杆菌丙酮酸激酶失活对L-Trp合成的影响 | 第87-96页 |
| 7.1 引言 | 第87页 |
| 7.2 材料与方法 | 第87-89页 |
| 7.2.1 菌株和质粒 | 第87页 |
| 7.2.2 试剂和仪器 | 第87页 |
| 7.2.3 培养基和培养方法 | 第87-88页 |
| 7.2.4 分子生物学操作 | 第88-89页 |
| 7.2.5 发酵参数的测定 | 第89页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第89-94页 |
| 7.3.1 菌株E.coliΔpykF的构建 | 第89-90页 |
| 7.3.2 菌株E.coliΔpykA的构建 | 第90-91页 |
| 7.3.3 菌株E.coliΔpykF/pykA的构建 | 第91-92页 |
| 7.3.4 菌株E.coliΔpykF,ΔpykA及ΔpykF/pykA摇瓶发酵 | 第92-93页 |
| 7.3.5 菌株E.coliΔpykF,ΔpykA及ΔpykF/pykA3L发酵罐分批补料发酵 | 第93-94页 |
| 7.4 本章小结 | 第94-96页 |
| 主要结论与展望 | 第96-99页 |
| 主要结论 | 第96-98页 |
| 展望 | 第98-99页 |
| 论文主要创新点 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-108页 |
| 附录1：附表 | 第108-117页 |
| 附录2：代谢产物名称的缩写及全称 | 第117-118页 |
| 附录3：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第118页 |
