| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 丝氨酸蛋白酶研究现状 | 第9-13页 |
| 1.1.1 蛋白酶的生理活性 | 第9-10页 |
| 1.1.2 蛋白酶的分类 | 第10页 |
| 1.1.3 蛋白酶的来源 | 第10-11页 |
| 1.1.4 蛋白酶的稳定性 | 第11-12页 |
| 1.1.5 蛋白酶的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 研究意义 | 第13页 |
| 1.3 研究内容 | 第13-15页 |
| 第2章 实验方法 | 第15-27页 |
| 2.1 引言 | 第15页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第15-17页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第15-16页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.3 试验方法 | 第17-27页 |
| 2.3.1 嗜热细菌DictyoglomusthermophilumH-6-12基因组的提取 | 第17页 |
| 2.3.2 丝氨酸蛋白酶DT1871基因的序列分析 | 第17页 |
| 2.3.3 引物设计 | 第17-18页 |
| 2.3.4 目的基因dt1871的PCR与纯化回收 | 第18页 |
| 2.3.5 dt1871PCR产物及载体pET-28aDNA的限制性酶切. | 第18-19页 |
| 2.3.6 酶切产物连接 | 第19-20页 |
| 2.3.7 重组质粒转化 | 第20-21页 |
| 2.3.8 重组质粒的鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.9 嗜热丝氨酸蛋白酶的诱导表达 | 第22-23页 |
| 2.3.10 嗜热丝氨酸蛋白酶包涵体变性和复性处理 | 第23页 |
| 2.3.11 蛋白酶浓度和活性测定 | 第23-24页 |
| 2.3.12 表达条件优化 | 第24-25页 |
| 2.3.13 蛋白酶DT1871的纯化 | 第25页 |
| 2.3.14 基础酶学性质测定 | 第25-27页 |
| 第3章 实验结果 | 第27-38页 |
| 3.1 嗜热细菌DictyoglomusthermophilumH-6-12基因组的提取 | 第27页 |
| 3.2 dt1871的序列分析及引物设计 | 第27-28页 |
| 3.3 目的基因PCR及回收 | 第28-29页 |
| 3.4 质粒pET-28a及目的基因双酶切 | 第29页 |
| 3.5 重组质粒鉴定 | 第29-32页 |
| 3.5.1 重组质粒提取 | 第29页 |
| 3.5.2 重组质粒酶切鉴定 | 第29-31页 |
| 3.5.3 基因测序 | 第31-32页 |
| 3.6 目的蛋白在表达宿主中的表达 | 第32页 |
| 3.7 表达条件优化 | 第32-35页 |
| 3.7.1 表达菌种对DT1871表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.7.2 诱导温度对DT1871表达的影响 | 第33-34页 |
| 3.7.3 IPTG浓度对DT1871蛋白表达的影响 | 第34-35页 |
| 3.8 DT1871丝氨酸蛋白酶的纯化 | 第35页 |
| 3.9 基础酶学性质测定 | 第35-38页 |
| 3.9.1 最适反应温度的测定 | 第35-36页 |
| 3.9.2 最适反应pH的测定 | 第36页 |
| 3.9.3 丝氨酸蛋白酶DT1871的热稳定性 | 第36-38页 |
| 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
