| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| 1.研究内容及意义 | 第14-16页 |
| 2.国内外研究进展 | 第16-23页 |
| 2.1 布鲁氏菌的研究进展 | 第16-17页 |
| 2.2 布鲁氏菌与转录因子的研究进展 | 第17-20页 |
| 2.3 染色质免疫共沉淀技术和ChIP-Seq的研究进展 | 第20-23页 |
| 第二章 实验部分 | 第23-84页 |
| 试验一、布鲁氏菌MarR6、GntR10和ArsR6基因缺失株的构建与生长特性分析 | 第23-44页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.3 仪器 | 第25页 |
| 1.4 牛种布鲁氏菌标准株S2308重要转录因子的筛选 | 第25页 |
| 1.5 引物合成 | 第25-26页 |
| 1.6 牛种布鲁氏菌标准株S2308中MarR6、GntR10和ArsR6的鉴定 | 第26页 |
| 1.7 MarR6、GntR10和ArsR6缺失株的构建及鉴定 | 第26-30页 |
| 1.8 牛种布鲁氏菌MarR6、GntR10和ArsR6缺失株生长特性检测 | 第30页 |
| 1.9 RAW264.7细胞的培养,侵染及CFU计数 | 第30页 |
| 1.10 布鲁氏菌ΔMarR6、ΔGntR10和ΔArsR6及亲本株侵染RAW264.7细胞因子的检测 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-41页 |
| 2.1 运用生物学软件预测分析数据 | 第30-32页 |
| 2.2 牛种布鲁氏菌2308的RNA提取与鉴定 | 第32-35页 |
| 2.3 布鲁氏菌2308-ΔMarR6、GntR10和ArsR6基因突变株筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4 布鲁氏菌MarR6、GntR10和ArsR6基因突变株传代 | 第36-37页 |
| 2.5 布鲁氏菌ΔMarR6、ΔGntR10和ΔArsR6及其亲本株S2308生长特性检测 | 第37-38页 |
| 2.6 布鲁氏菌ΔMarR6、ΔGntR10和ΔArsR6侵染细胞CFU计数 | 第38-39页 |
| 2.7 ΔMarR6、ΔGntR10和ΔArsR6缺失株对RAW264.7细胞因子分泌的影响 | 第39-41页 |
| 3.讨论 | 第41-44页 |
| 3.1 布鲁氏菌重要转录因子MarR6、GntR10和ArsR | 第41-42页 |
| 3.2 布鲁氏菌基因缺失株的构建方法 | 第42页 |
| 3.3 ΔMarR6、ΔGntR10和ΔArsR6生长特性分析 | 第42-44页 |
| 试验二、布鲁氏菌MarR6、GntR10和ArsR6基因的多克隆抗体制备及纯化 | 第44-59页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1.1 菌株、细胞和质粒 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 1.3 仪器 | 第45-46页 |
| 1.4 抗原MarR6、GntR10和ArsR6基因分析及设计 | 第46页 |
| 1.5 原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 1.6 MarR6、GntR10和ArsR6多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
| 1.7 抗体纯化和抗体含量的测定 | 第49页 |
| 1.8 抗血清Western-blot检测与验证 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-57页 |
| 2.1 MarR6、GntR10和ArsR6的生物信息学分析 | 第49-51页 |
| 2.2 MarR6、GntR10和ArsR6最适基因的扩增及连接T载体 | 第51-52页 |
| 2.3 重组表达质粒的鉴定 | 第52页 |
| 2.4 MarR6、GntR10和ArsR6蛋白的诱导表达及纯化 | 第52-55页 |
| 2.5 免疫流程 | 第55页 |
| 2.6 抗血清ELISA检测数据 | 第55页 |
| 2.7 抗血清纯化 | 第55-56页 |
| 2.8 抗原WB检测 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 3.1 抗原蛋白最适片段的选择 | 第57页 |
| 3.2 多克隆抗体的制备及纯化 | 第57-59页 |
| 试验三、布鲁氏菌MarR6、GntR10和ArsR6调控基因的筛选及GntR10功能研究 | 第59-84页 |
| 1 材料与方法 | 第60-68页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第60页 |
| 1.2 仪器 | 第60-61页 |
| 1.3 主要试剂 | 第61页 |
| 1.4 细菌的培养与处理 | 第61页 |
| 1.5 染色质免疫共沉淀 | 第61-62页 |
| 1.6 建库 | 第62-63页 |
| 1.7 染色质免疫共沉淀样品测序及数据分析 | 第63-64页 |
| 1.8 分析筛选牛种布鲁氏菌标准株2308重要转录因子RNA提取及靶基因验证 | 第64页 |
| 1.9 GntR10转录因子调控BAB_RS21490的缺失株构建和功能研究 | 第64-68页 |
| 2 结果 | 第68-81页 |
| 2.1 染色质免疫共沉淀DNA检测 | 第68-69页 |
| 2.2 建库和文库片段检测 | 第69-70页 |
| 2.3 染色质免疫共沉淀测序数据分析 | 第70-75页 |
| 2.4 分析筛选牛种布鲁氏菌标准株2308重要转录因子RNA提取及靶基因验证 | 第75-76页 |
| 2.5 BAB_RS21490缺失株的构建及功能分析 | 第76-81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| 3.1 MarR6、GntR10和ArsR6基因功能分析 | 第81-82页 |
| 3.2 染色质免疫共沉淀技术及应用 | 第82页 |
| 3.3 转录因子GntR10调控基因的功能分析 | 第82-84页 |
| 全文结论 | 第84-85页 |
| 创新点 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简介 | 第93-94页 |
| 导师评阅表 | 第94页 |
