| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 苹果概述 | 第13页 |
| 1.2 植物抗逆性研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.1 植物抗寒性的生理基础 | 第13-16页 |
| 1.2.1.1 细胞膜与植物抗寒性的关系 | 第14页 |
| 1.2.1.2 渗透调节物质与植物抗寒性的关系 | 第14-15页 |
| 1.2.1.3 酶系统与植物抗寒性的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.1.4 激素与植物抗寒性的关系 | 第16页 |
| 1.2.2 植物抗寒性的分子机制及抗寒基因的研究 | 第16-18页 |
| 1.2.2.1 抗寒性分子机理 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 抗寒基因的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 基因组学的研究方法 | 第18-23页 |
| 1.3.1 DNA微阵列或基因芯片技术 | 第19页 |
| 1.3.2 基因表达系列分析(SAGE)技术 | 第19页 |
| 1.3.3 大规模平行信号测序系统MPSS技术 | 第19页 |
| 1.3.4 Solexa测序 | 第19-23页 |
| 1.3.4.1 Solexa测序的基本原理 | 第20页 |
| 1.3.4.2 Solexa测序的基本流程 | 第20-22页 |
| 1.3.4.3 Solexa测序的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 TLP在植物中的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4.1 Tubby家族的成员及其分布 | 第23-24页 |
| 1.4.2 TLP家族蛋白质的功能 | 第24页 |
| 1.5 本实验的目的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 材料的冷处理 | 第25页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第25页 |
| 2.1.4 酶与各种试剂 | 第25页 |
| 2.1.5 实验器材 | 第25-26页 |
| 2.1.6 引物 | 第26-27页 |
| 2.1.7 软件和网络资源 | 第27页 |
| 2.2 主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验相关试剂溶液的配制 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 CTAB法提取植物RNA提取液的配置 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2 制备感受态所需试剂的配制 | 第28页 |
| 2.2.1.3 50×TAE缓冲液的配制 | 第28页 |
| 2.2.1.4 MS培养基母液的配置 | 第28页 |
| 2.2.2 实验所需培养基的配置 | 第28-29页 |
| 2.2.2.1 MS基本培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.2.2 LB基本培养基 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-41页 |
| 2.3.1 苹果M.26和Gala组培苗生理指标测定 | 第29-30页 |
| 2.3.1.1 相对电导率的测定 | 第29页 |
| 2.3.1.2 MDA含量测定 | 第29-30页 |
| 2.3.2 Solexa测序流程 | 第30页 |
| 2.3.3 数据统计分析 | 第30-33页 |
| 2.3.3.1 原始数据处理与统计 | 第30-31页 |
| 2.3.3.2 标签的基因注释 | 第31页 |
| 2.3.3.3 差异表达基因的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.3.4 Gene Ontology功能显著性富集分析 | 第32页 |
| 2.3.3.5 Pathway显著性富集分析 | 第32-33页 |
| 2.3.4 实时定量PCR | 第33-34页 |
| 2.3.5 苹果MdTLP7基因全长及截短体/突变体的克隆与序列测定 | 第34-38页 |
| 2.3.5.1 苹果MdTLP7基因全长及四种截短体/突变体的设计 | 第34页 |
| 2.3.5.2 苹果MdTLP7基因的生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.3.5.3 苹果叶片总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.3.5.4 RNA反转录 | 第35页 |
| 2.3.5.5 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.5.6 PCR扩增产物的胶回收 | 第36页 |
| 2.3.5.7 胶回收产物与pMD18-Tsimple载体连接 | 第36-37页 |
| 2.3.5.8 大肠杆菌感受态DHB4的制备 | 第37页 |
| 2.3.5.9 连接产物转化感受态DHB4细胞 | 第37页 |
| 2.3.5.10 阳性克隆的筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.6 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.3.6.1 试剂盒小量碱法提取质粒DNA | 第38-39页 |
| 2.3.6.2 目的片段和表达载体pET-30a(+)的双酶切 | 第39页 |
| 2.3.6.3 目的片段与质粒酶切胶回收产物连接 | 第39页 |
| 2.3.7 E.coli Rosetta原核表达的诱导 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-57页 |
| 3.1 M.26具有较强的抗寒能力 | 第41-42页 |
| 3.1.1 低温对苹果不同品种叶片细胞膜相对电导率的影响 | 第41页 |
| 3.1.2 低温对苹果不同品种叶片中MDA含量的影响 | 第41-42页 |
| 3.2 Solexa测序数据的统计及基因注释 | 第42-43页 |
| 3.3 差异基因的筛选 | 第43-46页 |
| 3.4 GO功能分类和KEGG Pathway显著性分析 | 第46-47页 |
| 3.5 qRT-PCR对测序结果的验证 | 第47-49页 |
| 3.6 苹果MdTLP7基因全长的克隆和结构特征 | 第49-51页 |
| 3.6.1 苹果MdTLP7基因全长的克隆 | 第49-50页 |
| 3.6.2 苹果MdTLP7蛋白Tubby结构域的结构特征 | 第50-51页 |
| 3.7 MdTLP7的表达在原核系统逆境胁迫中的作用 | 第51-53页 |
| 3.8 MdTLP7蛋白中发挥抗逆功能的区域 | 第53-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67页 |
