| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 肿瘤 | 第12页 |
| 1.2 DNA嵌插剂与肿瘤治疗 | 第12-13页 |
| 1.3 Thiocoraline的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 肿瘤多药耐药及其发生机制 | 第14-16页 |
| 1.4.1 膜蛋白外排泵介导细胞耐药 | 第15页 |
| 1.4.2 细胞内相关酶介导耐药 | 第15-16页 |
| 1.4.3 信号通路异常介导的耐药 | 第16页 |
| 1.4.4 细胞凋亡介导耐药 | 第16页 |
| 1.5 本课题研究内容及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 Thiocoraline的抗肿瘤活性研究 | 第18-36页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 实验药物 | 第18页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第18页 |
| 2.2 主要试剂与仪器 | 第18-20页 |
| 2.2.1 试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.2 仪器 | 第19-20页 |
| 2.3 主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| 2.3.1 PBS磷酸盐缓冲液(1×) | 第20页 |
| 2.3.2 5mg/mLMTT溶液 | 第20页 |
| 2.3.3 2%结晶紫溶液 | 第20页 |
| 2.3.4 PBST(1×) | 第20页 |
| 2.3.5 10%(w/v)过硫酸铵(APS)溶液 | 第20页 |
| 2.3.6 10%(w/v)十二烷基硫酸钠(SDS)溶液 | 第20页 |
| 2.3.7 Tris-甘氨酸电泳缓冲液(1×) | 第20-21页 |
| 2.3.8 Tris-甘氨酸电转缓冲液(1×) | 第21页 |
| 2.3.9 细胞培养基 | 第21页 |
| 2.3.10 Thiocoraline母液配制 | 第21页 |
| 2.3.11 Doxorubicin母液配制 | 第21页 |
| 2.4 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第21-23页 |
| 2.4.2 MTT法检测thiocoraline对MCF-7细胞,L-02细胞的毒性作用 | 第23页 |
| 2.4.3 结晶紫染色比较thiocoraline和doxorubicin对MCF-7细胞的作用效果 | 第23-24页 |
| 2.4.4 流式细胞术检测thiocoraline对细胞周期的影响 | 第24页 |
| 2.4.5 Hoechst33342检测细胞凋亡 | 第24页 |
| 2.4.6 WesternBlot分析thiocoraline诱导细胞凋亡的作用机制 | 第24-27页 |
| 2.4.7 统计学分析 | 第27页 |
| 2.5 实验结果 | 第27-34页 |
| 2.5.1 MTT法检测thiocoraline对MCF-7细胞的毒性作用 | 第27-28页 |
| 2.5.2 Thiocoraline作用于MCF-7细胞的半抑制有效浓度的测定 | 第28页 |
| 2.5.3 Thiocoraline安全性效果评价 | 第28-29页 |
| 2.5.4 MTT法检测doxorubicin对MCF-7细胞的毒性作用 | 第29-30页 |
| 2.5.5 Doxorubicin作用于MCF-7细胞的半抑制有效浓度的测定 | 第30页 |
| 2.5.6 结晶紫染色法比较thiocoraline,doxorubicin对MCF-7细胞的毒性作用 | 第30-31页 |
| 2.5.7 细胞周期检测 | 第31-32页 |
| 2.5.8 Hoechst33342检测细胞凋亡 | 第32-33页 |
| 2.5.9 Thiocoraline通过Caspase通路诱导MCF-7细胞凋亡 | 第33-34页 |
| 2.6 总结与讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 MCF-7细胞对thiocoraline耐药机制的研究 | 第36-50页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.1 实验药物 | 第36页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第36页 |
| 3.2 主要试剂与仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.1 试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.2 仪器 | 第37页 |
| 3.3 主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| 3.3.1 LB液体培养基 | 第37页 |
| 3.3.2 TAE(50×) | 第37页 |
| 3.3.3 MK-2206HCl母液配制 | 第37-38页 |
| 3.4 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.4.1 细胞培养 | 第38页 |
| 3.4.2 Thiocoraline耐药株MCF-7/T的构建 | 第38页 |
| 3.4.3 MCF-7/Akt1高表达株的构建 | 第38页 |
| 3.4.4 细胞生长曲线测定 | 第38-39页 |
| 3.4.5 克隆形成能力检测 | 第39页 |
| 3.4.6 MTT法测定细胞活性 | 第39页 |
| 3.4.7 Trizol法提取总RNA | 第39-40页 |
| 3.4.8 半定量RT-PCR检测乳腺癌耐药相关蛋白的表达水平 | 第40-41页 |
| 3.4.9 qPCR检测乳腺癌耐药相关蛋白的表达水平 | 第41页 |
| 3.4.10 WesternBlot检测蛋白表达水平 | 第41-42页 |
| 3.4.11 统计学分析 | 第42页 |
| 3.5 实验结果 | 第42-48页 |
| 3.5.1 MCF-7/T的耐药指数 | 第42-43页 |
| 3.5.2 MCF-7/T与MCF-7细胞生物学特征比较 | 第43-44页 |
| 3.5.3 半定量RT-PCR初步检测乳腺癌相关耐药蛋白的表达水平 | 第44页 |
| 3.5.4 qPCR及WesternBlot检测MCF-7/T耐药细胞内蛋白水平变化 | 第44-45页 |
| 3.5.5 Thiocoraline作用MCF-7细胞72h后相关蛋白水平的分析 | 第45页 |
| 3.5.6 MCF-7细胞内Akt的磷酸化水平提高及其对thiocoraline敏感性的分析 | 第45-46页 |
| 3.5.7 抑制MCF-7细胞内Akt磷酸化水平及其对thiocoraline敏感性分析 | 第46-47页 |
| 3.5.8 抑制耐药株MCF-7/T细胞内Akt磷酸化水平及其对thiocoraline敏感性分析 | 第47-48页 |
| 3.6 总结与讨论 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 硕士期间已发表论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
