| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 前言 | 第19-32页 |
| 第一章 缺氧导致大鼠肾脏HIF-1α活化伴肾脏损伤和miR-210上调 | 第32-54页 |
| 1.1 材料与方法 | 第32-39页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 1.1.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.1.1.2 主要仪器 | 第32-33页 |
| 1.1.1.3 主要试剂 | 第33-34页 |
| 1.1.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 1.1.2.1 动物分组 | 第34页 |
| 1.1.2.2 系统性缺氧以及局部缺氧大鼠模型制作 | 第34-35页 |
| 1.2.2.3 总RNA(含miR)的提取(组织) | 第35页 |
| 1.2.2.4 RT-PCR实验 | 第35-36页 |
| 1.2.2.5 实时荧光定量PCR(realtime-quantitativePCR,q-PCR) | 第36页 |
| 1.2.2.6 引物设计(大鼠) | 第36页 |
| 1.2.2.7 大鼠生化指标的检测 | 第36-37页 |
| 1.2.2.8 大鼠肾脏细胞原代分离 | 第37页 |
| 1.2.2.9 PAS染色 | 第37页 |
| 1.2.2.10 TUNEL染色 | 第37-38页 |
| 1.2.2.11 常用试剂配置 | 第38页 |
| 1.1.3 统计处理方法 | 第38-39页 |
| 1.2 实验结果 | 第39-50页 |
| 1.2.1 系统性缺氧大鼠(7500m/7h)导致大鼠组织HIF通路活化 | 第39-41页 |
| 1.2.2 局部肾缺氧导致大鼠肾脏的HIF-1α活化更加显著 | 第41-43页 |
| 1.2.3 局部肾缺氧导致大鼠明显肾小管结构损伤 | 第43-44页 |
| 1.2.4 系统性缺氧以及局部缺氧均会导致肾脏凋亡增加 | 第44-46页 |
| 1.2.5 缺氧会导致肾脏功能损伤,局部缺氧肾功能损害更加严重 | 第46-47页 |
| 1.2.6 系统性缺氧会导致重要组织器官miR-210表达上调,其中肾脏升高最明显 | 第47-48页 |
| 1.2.7 系统性缺氧和局部缺氧均可以导致肾脏中miR-210表达明显上调 | 第48-49页 |
| 1.2.8 局部肾缺氧导致血清中miR-210表达升高 | 第49页 |
| 1.2.9 miR-210在原代分离的肾小管中的升高程度显著高于肾小球 | 第49-50页 |
| 1.3 结果总结 | 第50-51页 |
| 1.4 讨论 | 第51-53页 |
| 1.5 结论 | 第53-54页 |
| 第二章 miR-210减轻人肾小管HK-2细胞的缺氧损伤 | 第54-76页 |
| 2.1 材料与方法 | 第54-64页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 2.1.1.1 实验用细胞 | 第54页 |
| 2.1.1.2 主要仪器 | 第54-55页 |
| 2.1.1.3 主要试剂及耗材 | 第55-56页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第56-63页 |
| 2.1.2.1 常用试剂配置 | 第56-57页 |
| 2.1.2.2 细胞复苏 | 第57页 |
| 2.1.2.3 HK-2细胞的培养 | 第57页 |
| 2.1.2.4 细胞缺氧条件处理 | 第57-58页 |
| 2.1.2.5 AnnexinV/PI双染测定细胞凋亡 | 第58页 |
| 2.1.2.6 LDH测细胞毒性 | 第58-59页 |
| 2.1.2.7 westernblot实验 | 第59-62页 |
| 2.1.2.8 mRNA引物 | 第62页 |
| 2.1.2.9 western抗体(一抗) | 第62-63页 |
| 2.1.2.10 western抗体(二抗) | 第63页 |
| 2.1.2.11 miR-210的过表达以及敲低(24孔板,50nM) | 第63页 |
| 2.1.3 统计处理方法 | 第63-64页 |
| 2.2 实验结果 | 第64-73页 |
| 2.2.1 严重缺氧(0.3%)导致HK-2细胞HIF通路相关分子mRNA的上调 | 第64页 |
| 2.2.2 严重缺氧(0.3%)导致人肾小管上皮细胞HIF通路相关蛋白表达上调 | 第64-66页 |
| 2.2.3 严重缺氧(0.3%)导致HK-2胞细胞内以及上清中miR-210表达升高 | 第66-68页 |
| 2.2.4 过表达miR-210可减轻HK-2细胞的缺氧性损伤 | 第68-70页 |
| 2.2.4.1 过表达miR-210会保护HK-2细胞减轻缺氧后损伤 | 第68-69页 |
| 2.2.4.2 过表达miR-210会减轻缺氧后细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 2.2.5 敲低miR-210可加重细胞的缺氧性损伤 | 第70-73页 |
| 2.2.5.1 敲低miR-210会加重HK-2细胞缺氧损伤 | 第70-71页 |
| 2.2.5.2 敲低miR-210会加重缺氧后细胞凋亡 | 第71-73页 |
| 2.3 结果总结 | 第73页 |
| 2.4 讨论 | 第73-75页 |
| 2.5 结论 | 第75-76页 |
| 第三章 miR-210通过靶向HIF-1α在缺氧肾损伤中起保护作用 | 第76-100页 |
| 3.1 材料与方法 | 第76-83页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第76-78页 |
| 3.1.1.1 实验用细胞 | 第76页 |
| 3.1.1.2 主要仪器 | 第76-77页 |
| 3.1.1.3 主要试剂及耗材： | 第77-78页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第78-82页 |
| 3.1.2.1 常用试剂配置 | 第78-79页 |
| 3.1.2.2 质粒转化大肠杆菌菌感受态 | 第79-80页 |
| 3.1.2.3 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第80页 |
| 3.1.2.4 小规模质粒提取 | 第80页 |
| 3.1.2.5 报告基因质粒 | 第80-81页 |
| 3.1.2.6 pGL3-HIF-1αmRNA3‘UTRWT/MT荧光素酶质粒构建 | 第81-82页 |
| 3.1.2.7 细胞转染及双荧光报告基因测试 | 第82页 |
| 3.1.2.8 HIF-1α的敲低(24孔板,100nM) | 第82页 |
| 3.1.3 统计处理方法 | 第82-83页 |
| 3.2 实验结果 | 第83-96页 |
| 3.2.1 HIF-1α和miR-210的动态表达变化规律 | 第83页 |
| 3.2.2 miR-210是HIF-1α的靶分子而非HIF-2α靶分子 | 第83-87页 |
| 3.2.2.1 敲低HIF-1α的效果验证 | 第83-84页 |
| 3.2.2.2 miR-210是HIF-1α的靶分子 | 第84-85页 |
| 3.2.2.3 敲低HIF-2α对miR-210表达没有影响 | 第85-87页 |
| 3.2.3 HIF-1α是miR-210的靶基因 | 第87-90页 |
| 3.2.3.1 利用生物信息学预测miR-210和HIF-1α结合可能位点 | 第87页 |
| 3.2.3.2 Luciferase实验证实miR-210可直接靶向HIF-1αmRNA的3‘UTR端 | 第87-90页 |
| 3.2.4 过表达miR-210可抑制HIF-1α通路以及凋亡通路 | 第90-93页 |
| 3.2.4.1 过表达miR-210能靶向抑制HIF-1α以及凋亡通路相关分子的mRNA | 第90-91页 |
| 3.2.4.2 过表达miR-210会抑制HIF-1α以及凋亡通路相关分子蛋白表达水平 | 第91-93页 |
| 3.2.5 敲低miR-210可活化HIF-1α通路以及凋亡通路 | 第93-96页 |
| 3.2.5.1 敲低miR-210上调HIF-1α以及凋亡通路相关分子mRNA | 第93-94页 |
| 3.2.5.2 敲低miR-210能上调HIF-1α以及凋亡通路相关分子的蛋白表达。 | 第94-96页 |
| 3.3 结果总结 | 第96页 |
| 3.4 讨论 | 第96-99页 |
| 3.5 结论 | 第99-100页 |
| 第四章 结论与展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第110-112页 |
| 主要简历 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
