| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第23-25页 |
| 1 绪论 | 第25-47页 |
| 1.1 乳腺癌与乳腺癌转移 | 第25-27页 |
| 1.1.1 乳腺癌简介 | 第25-26页 |
| 1.1.2 乳腺癌转移 | 第26-27页 |
| 1.2 上皮细胞-间充质转化 | 第27-37页 |
| 1.2.1 EMT细胞形态变化 | 第27-28页 |
| 1.2.2 EMT的类型 | 第28-30页 |
| 1.2.3 EMT标志物 | 第30-33页 |
| 1.2.4 EMT调节因子 | 第33-36页 |
| 1.2.5 靶向EMT的药物研究现状 | 第36-37页 |
| 1.3 环孢素 | 第37-40页 |
| 1.3.1 环孢素A结构与临床药理学 | 第37-38页 |
| 1.3.2 环孢素A的免疫抑制作用机制 | 第38-39页 |
| 1.3.3 环孢素A在癌症中的作用 | 第39页 |
| 1.3.4 环孢素A的不良反应 | 第39-40页 |
| 1.4 亲环素蛋白家族 | 第40-44页 |
| 1.4.1 亲环素蛋白A | 第41-42页 |
| 1.4.2 亲环素类似蛋白2 | 第42-43页 |
| 1.4.3 其他亲环素蛋白 | 第43-44页 |
| 1.5 靶向泛素-蛋白酶体治疗方案的研究现状 | 第44-45页 |
| 1.6 本文选题依据和研究内容 | 第45-47页 |
| 1.6.1 选题依据 | 第45页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第45-47页 |
| 2 PPIL2对乳腺癌细胞形态及转移的影响 | 第47-67页 |
| 2.1 引言 | 第47页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第47-50页 |
| 2.2.1 仪器 | 第47-48页 |
| 2.2.2 试剂 | 第48-49页 |
| 2.2.3 试剂配制 | 第49-50页 |
| 2.2.4 菌种、质粒、细胞、microRNA及实验动物 | 第50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-60页 |
| 2.3.1 获取MCF-7细胞的RNA和cDNA | 第50页 |
| 2.3.2 外源表达载体Flag-PPIL2质粒的构建 | 第50-52页 |
| 2.3.3 质粒转化 | 第52页 |
| 2.3.4 质粒制备 | 第52页 |
| 2.3.5 质粒测序 | 第52-53页 |
| 2.3.6 microRNA | 第53页 |
| 2.3.7 细胞培养 | 第53页 |
| 2.3.8 细胞转染 | 第53-54页 |
| 2.3.9 细胞筛选 | 第54页 |
| 2.3.10 蛋白样品制备 | 第54页 |
| 2.3.11 蛋白浓度测定 | 第54-55页 |
| 2.3.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第55页 |
| 2.3.13 免疫印迹 | 第55-56页 |
| 2.3.14 免疫荧光 | 第56-57页 |
| 2.3.15 细胞划痕实验 | 第57页 |
| 2.3.16 Transwell侵袭小室实验 | 第57-58页 |
| 2.3.17 小鼠乳腺癌肺转移模型 | 第58页 |
| 2.3.18 H&E染色 | 第58-60页 |
| 2.3.19 统计学分析 | 第60页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第60-65页 |
| 2.4.1 PPIL2水平与F-actin分布和细胞形态的关系 | 第60-62页 |
| 2.4.2 PPIL2水平抑制乳腺癌细胞转移 | 第62-63页 |
| 2.4.3 PPIL2对BALB/c小鼠体内4T1/Luc细胞肺转移能力的影响 | 第63-65页 |
| 2.5 讨论 | 第65-66页 |
| 2.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 3 PPIL2抑制EMT过程 | 第67-83页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第67-71页 |
| 3.2.1 仪器 | 第67-68页 |
| 3.2.2 试剂 | 第68-70页 |
| 3.2.3 试剂配制 | 第70-71页 |
| 3.2.4 菌种、细胞、microRNA及质粒 | 第71页 |
| 3.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第71页 |
| 3.3.2 细胞转染 | 第71页 |
| 3.3.3 蛋白样品制备 | 第71页 |
| 3.3.4 蛋白浓度测定 | 第71页 |
| 3.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第71页 |
| 3.3.6 免疫印迹 | 第71-72页 |
| 3.3.7 免疫荧光 | 第72页 |
| 3.3.8 ZR-75-30细胞基因组DNA制备 | 第72页 |
| 3.3.9 荧光素酶报告基因 | 第72页 |
| 3.3.10 RT-PCR | 第72-73页 |
| 3.3.11 染色质免疫共沉淀 | 第73-75页 |
| 3.3.12 统计学分析 | 第75页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第75-80页 |
| 3.4.1 PPIL2对EMT标志物蛋白水平的影响 | 第75-77页 |
| 3.4.2 PPIL2对E-cadherin和N-cadherin水平及分布的影响 | 第77-78页 |
| 3.4.3 PPIL2对E-cadherin和N-cadherin转录活性的影响 | 第78-79页 |
| 3.4.4 PPIL2对E-cadherin和N-cadherin mRNA水平的影响 | 第79-80页 |
| 3.4.5 PPIL2调节SNAI1在E-cadherin启动子上的结合水平 | 第80页 |
| 3.5 讨论 | 第80-82页 |
| 3.6 本章小结 | 第82-83页 |
| 4 PPIL2与SNAI1之间的相互作用 | 第83-101页 |
| 4.1 引言 | 第83页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第83-86页 |
| 4.2.1 仪器 | 第83-84页 |
| 4.2.2 试剂 | 第84-85页 |
| 4.2.3 试剂配制 | 第85-86页 |
| 4.2.4 菌种、细胞、microRNA及质粒 | 第86页 |
| 4.3 实验方法 | 第86-91页 |
| 4.3.1 HA-PPIL2质粒构建 | 第86页 |
| 4.3.2 PPIL2和SNAI1截短体质粒构建 | 第86页 |
| 4.3.3 pACT-PPIL2质粒构建 | 第86-87页 |
| 4.3.4 质粒转化 | 第87页 |
| 4.3.5 质粒制备 | 第87页 |
| 4.3.6 质粒测序 | 第87页 |
| 4.3.7 细胞培养 | 第87页 |
| 4.3.8 细胞转染 | 第87-88页 |
| 4.3.9 蛋白样品制备 | 第88页 |
| 4.3.10 蛋白浓度测定 | 第88页 |
| 4.3.11 免疫共沉淀 | 第88页 |
| 4.3.12 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第88页 |
| 4.3.13 免疫印迹 | 第88页 |
| 4.3.14 哺乳动物双杂交系统 | 第88-89页 |
| 4.3.15 GST-pulldown | 第89-90页 |
| 4.3.16 免疫荧光 | 第90页 |
| 4.3.17 核质分离实验 | 第90页 |
| 4.3.18 统计学分析 | 第90-91页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第91-99页 |
| 4.4.1 外源PPIL2与SNAI1之间的相互作用 | 第91页 |
| 4.4.2 内源PPIL2与SNAI1之间的相互作用 | 第91-92页 |
| 4.4.3 哺乳动物双杂交实验确定PPIL2与SNAI1之间的相互作用 | 第92页 |
| 4.4.4 GST-pulldown实验确定PPIL2与SNAI1之间的相互作用 | 第92-93页 |
| 4.4.5 PPIL2与SNAI1的共定位 | 第93-94页 |
| 4.4.6 PPIL2与SNAI1相互作用的结构域 | 第94-95页 |
| 4.4.7 PPIL2促进SNAI1通过蛋白酶体降解 | 第95-96页 |
| 4.4.8 PPIL2降低SNAI1蛋白稳定性 | 第96页 |
| 4.4.9 PPIL2提高SNAI1泛素化水平 | 第96-98页 |
| 4.4.10 PPIL2提高细胞核中SNAI1的泛素化水平 | 第98-99页 |
| 4.5 讨论 | 第99-100页 |
| 4.6 本章小结 | 第100-101页 |
| 5 环孢素A对乳腺癌转移的影响 | 第101-111页 |
| 5.1 引言 | 第101页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第101-102页 |
| 5.2.1 仪器 | 第101页 |
| 5.2.2 试剂 | 第101页 |
| 5.2.3 试剂配制 | 第101页 |
| 5.2.4 菌种、细胞及质粒 | 第101-102页 |
| 5.3 实验方法 | 第102-103页 |
| 5.3.1 质粒转化 | 第102页 |
| 5.3.2 质粒制备 | 第102页 |
| 5.3.3 质粒测序 | 第102页 |
| 5.3.4 细胞培养 | 第102页 |
| 5.3.5 细胞转染 | 第102页 |
| 5.3.6 蛋白样品制备 | 第102页 |
| 5.3.7 蛋白浓度测定 | 第102页 |
| 5.3.8 免疫共沉淀 | 第102页 |
| 5.3.9 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第102页 |
| 5.3.10 免疫印迹 | 第102页 |
| 5.3.11 核质分离实验 | 第102页 |
| 5.3.12 免疫荧光 | 第102-103页 |
| 5.3.13 细胞划痕实验 | 第103页 |
| 5.3.14 侵袭小室实验 | 第103页 |
| 5.3.15 小鼠乳腺癌肺转移模型 | 第103页 |
| 5.3.16 H&E染色 | 第103页 |
| 5.3.17 统计学分析 | 第103页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第103-109页 |
| 5.4.1 环孢素A对乳腺癌细胞中PPIL2蛋白水平的影响 | 第103-106页 |
| 5.4.2 环孢素A通过PPIL2抑制ZR-75-30细胞的迁移与侵袭 | 第106-108页 |
| 5.4.3 环孢素A和PPIL2与小鼠乳腺癌转移的关系 | 第108-109页 |
| 5.5 讨论 | 第109-110页 |
| 5.6 本章小结 | 第110-111页 |
| 6 PPIL2对乳腺癌转移的影响 | 第111-117页 |
| 6.1 引言 | 第111页 |
| 6.2 仪器与试剂 | 第111页 |
| 6.2.1 仪器 | 第111页 |
| 6.2.2 试剂 | 第111页 |
| 6.2.3 试剂配制 | 第111页 |
| 6.2.4 样本 | 第111页 |
| 6.3 实验方法 | 第111-113页 |
| 6.3.1 免疫组织化学 | 第111-113页 |
| 6.3.2 统计学分析 | 第113页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第113-116页 |
| 6.4.1 PPIL2与SNAI1在人乳腺癌组织中的表达与意义 | 第113-116页 |
| 6.5 讨论 | 第116页 |
| 6.6 本章小结 | 第116-117页 |
| 7 结论与展望 | 第117-119页 |
| 7.1 结论 | 第117页 |
| 7.2 创新点 | 第117-118页 |
| 7.3 展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 作者简介 | 第129页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
