| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-23页 |
| 1 组织因子的分子结构及生物学功能 | 第15-18页 |
| ·TF的分子结构 | 第15-16页 |
| ·TF的生物学功能 | 第16-18页 |
| 2 基因工程抗体概述 | 第18-21页 |
| ·基因工程抗体的发展概括 | 第18-19页 |
| ·人源化单克隆抗体改造 | 第19-21页 |
| 3 抗体药物的研究进展 | 第21页 |
| 4 CHO细胞表达系统 | 第21-22页 |
| 5 本文的研究内容、目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 组织因子(TF)人-鼠嵌合抗体表达载体的构建 | 第23-33页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第23-24页 |
| ·细胞株、菌株、质粒和培养基 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-28页 |
| ·克隆TF单克隆抗体可变区基因 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pMD19-T-V_L、pMD19-T-V_H的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pCN40-V_L-V_H的构建及鉴定 | 第26-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-31页 |
| ·V_H和V_L基因的RT-PCR扩增和鉴定 | 第28页 |
| ·VL和VH基因重组质粒pMD19-T-V_L、pMD19-T-V_H构建和鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pCN40-V_L-V_H构建和鉴定 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 组织因子人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中表达及纯化 | 第33-44页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| ·细胞株与质粒 | 第33页 |
| ·主要化学试剂 | 第33页 |
| ·转染试剂 | 第33-34页 |
| ·免疫分析试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-38页 |
| ·CHO-K1真核表达细胞株的复苏 | 第34页 |
| ·TF嵌合抗体表达载体pCN40-V_L-V_H的纯度分析和含量测定 | 第34-35页 |
| ·TF嵌合抗体在CHO细胞中稳定表达 | 第35-36页 |
| ·CHO转染细胞阳性克隆和培养上清中抗体的含量测定 | 第36页 |
| ·细胞培养上清中嵌合抗体的鉴定 | 第36页 |
| ·阳性细胞生长曲线的绘制 | 第36页 |
| ·阳性细胞中目的基因PCR鉴定 。.. | 第36-37页 |
| ·重组Protein A(rProtein A)亲和柱纯化TF嵌合抗体 | 第37页 |
| ·嵌合抗体重链和轻链分子量和纯度检测 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-42页 |
| ·嵌合抗体重组质粒纯度和含量的测定 | 第38页 |
| ·获得嵌合抗体稳定细胞株 | 第38页 |
| ·嵌合抗体阳性细胞培养上清中抗体表达量的测定 | 第38-39页 |
| ·嵌合抗体的Western blot检测 | 第39页 |
| ·细胞生长曲线 | 第39页 |
| ·TF嵌合抗体转染细胞中目的基因的鉴定 | 第39-41页 |
| ·嵌合抗体的纯化和定量 | 第41-42页 |
| ·蛋白电泳后检测TF人-鼠嵌合抗体 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 抗人TF人-鼠嵌合抗体生物活性 | 第44-50页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·细胞株 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-45页 |
| ·TF人-鼠嵌合抗体对四种癌细胞增值抑制作用分析 | 第44-45页 |
| ·TF人-鼠嵌合抗体抗促凝活性的分析 | 第45页 |
| ·统计学分析方法 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| ·TF人-鼠嵌合抗体对四种癌细胞增值抑制作用分析 | 第45页 |
| ·TF人-鼠嵌合抗体抗促凝活性的分析 | 第45-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 结论与展望 | 第52-53页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简况及联系方式 | 第55-57页 |
