| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第11页 |
| 1.2 Bt的研究历史 | 第11-12页 |
| 1.3 Bt的生命周期 | 第12-13页 |
| 1.4 杀虫基因的表达和调控 | 第13-15页 |
| 1.5 杀虫晶体蛋白作用机制 | 第15-17页 |
| 1.6 苏云金芽胞杆菌Cry1类和Cry2类蛋白研究现状 | 第17-19页 |
| 1.6.1 Cry1类蛋白 | 第17-19页 |
| 1.6.2 Cry2类蛋白 | 第19页 |
| 1.7 本研究的立题依据以及目的意义 | 第19-20页 |
| 2 材料及方法 | 第20-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 设备及仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 PCR扩增引物 | 第23-24页 |
| 2.1.5 供试昆虫 | 第24页 |
| 2.2 研究方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 晶体形态观察 | 第24页 |
| 2.2.2 PCR模板的制备 | 第24页 |
| 2.2.3 PCR-RFLP鉴定cry1基因型 | 第24-25页 |
| 2.2.4 cry2类基因的鉴定 | 第25页 |
| 2.2.5 DNA回收 | 第25页 |
| 2.2.6 连接反应 | 第25页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 2.2.8 大肠杆菌热激转化 | 第26页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.10 酶切鉴定体系 | 第26页 |
| 2.2.11 全长基因的扩增、克隆及序列测定 | 第26-27页 |
| 2.2.12 基因在大肠杆菌中表达 | 第27-28页 |
| 2.2.13 蛋白电泳检测 | 第28页 |
| 2.2.14 蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.15 Western Blot免疫印迹反应 | 第29-30页 |
| 2.2.16 杀虫活性测定 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-49页 |
| 3.1 cry1类基因PCR-RFLP鉴定 | 第31-35页 |
| 3.1.1 cry1类基因扩增产物和酶切片段多态性 | 第31-32页 |
| 3.1.2 鉴定Bt分离菌株cry1类基因 | 第32-35页 |
| 3.2 两株Bt菌株晶体形态及其cry基因型鉴定 | 第35-38页 |
| 3.2.1 Bt菌株FH21和V4的晶体形态 | 第35-36页 |
| 3.2.2 菌株FH21和V4的cry1基因型PCR-RFLP鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2.3 菌株V4的cry2Aa类基因型鉴定与全长基因的扩增 | 第38页 |
| 3.3 基因的克隆及序列分析 | 第38-44页 |
| 3.3.1 Bt菌株FH21中cry1Bb基因的克隆及序列分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 Bt菌株FH21中cry1Da基因的克隆及序列分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 Bt菌株FH21中cry1Id基因的克隆及序列分析 | 第40页 |
| 3.3.4 Bt菌株V4中cry1Ea基因的克隆及序列分析 | 第40-41页 |
| 3.3.5 Bt菌株V4中cry1Ia基因的克隆及序列分析 | 第41-42页 |
| 3.3.6 Bt菌株V4中cry2Aa基因的克隆及序列分析 | 第42-44页 |
| 3.4 基因的异源表达 | 第44-47页 |
| 3.4.1 构建cry基因异源表达载体 | 第44-45页 |
| 3.4.2 cry基因在大肠杆菌中表达 | 第45-46页 |
| 3.4.3 Cry1Ea12蛋白的纯化和western blot免疫印迹 | 第46-47页 |
| 3.5 蛋白杀虫活性的研究 | 第47-49页 |
| 3.5.1 Cry1Ea12、Cry2Aa16以及BtV4蛋白杀虫活性的测定 | 第47页 |
| 3.5.2 Cry1Bb3、Cry1Da4、Cry1Id3及BtFH21蛋白杀虫活性的测定 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
