| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略语 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-17页 |
| 2.1 主要试剂与仪器 | 第14-16页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第14-16页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第16页 |
| 2.2 研究对象及分组 | 第16-17页 |
| 3 实验方法 | 第17-32页 |
| 3.1 细胞培养与传代 | 第17页 |
| 3.2 慢病毒感染U2OS细胞,沉默miR-106a表达,构建实验组和对照组 | 第17-22页 |
| 3.2.1 microRNA-106a-inhibitor慢病毒克隆的制备 | 第17-20页 |
| 3.2.2 核心质粒包装进慢病毒载体 | 第20-21页 |
| 3.2.3 慢病毒浓缩与纯化 | 第21页 |
| 3.2.4 慢病毒质量检测 | 第21-22页 |
| 3.2.5 慢病毒感染U2OS细胞 | 第22页 |
| 3.3 总RNA提取及逆转录反应 | 第22-24页 |
| 3.3.1 U2OS细胞、hFOB1.19细胞、miR-106a-inhibitor和miR-NC总RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.3.2 细胞总RNA浓度及纯度测量 | 第23页 |
| 3.3.3 细胞总RNA逆转录反应 | 第23-24页 |
| 3.4 实时定量PCR反应 | 第24-25页 |
| 3.5 细胞功能学实验 | 第25-28页 |
| 3.5.1 细胞增殖实验 | 第25-26页 |
| 3.5.2 细胞迁移实验 | 第26页 |
| 3.5.3 细胞侵袭实验 | 第26-27页 |
| 3.5.4 细胞周期实验 | 第27-28页 |
| 3.5.5 细胞凋亡实验 | 第28页 |
| 3.6 生物信息学分析 | 第28页 |
| 3.7 Western Blot实验 | 第28-30页 |
| 3.8 双荧光素酶报告基因实验 | 第30-32页 |
| 3.9 统计学分析 | 第32页 |
| 4 结果 | 第32-44页 |
| 4.1 MiR-106a在人骨肉瘤细胞系U2OS中高表达 | 第32-33页 |
| 4.2 慢病毒能高效地感染U2OS细胞 | 第33-35页 |
| 4.3 沉默U2OS细胞中miR-106a的表达能抑制U2OS细胞增殖能力 | 第35页 |
| 4.4 沉默U2OS细胞中miR-106a的表达能降低U2OS细胞体外迁移和侵袭能力 | 第35-37页 |
| 4.5 沉默U2OS细胞中miR-106a的表达能改变U2OS细胞周期分布 | 第37-38页 |
| 4.6 沉默U2OS细胞中miR-106a的表达能增加U2OS细胞的凋亡率 | 第38-40页 |
| 4.7 VNN2是miR-106a作用于骨肉瘤的靶基因 | 第40-41页 |
| 4.8 沉默U2OS细胞中miR-106a的表达可以使VNN2表达增加 | 第41-44页 |
| 5 讨论 | 第44-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 文献综述 | 第53-75页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |
