| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 全球转基因作物的发展现状 | 第11-13页 |
| 1.2 转基因成分分析的新需求和挑战 | 第13页 |
| 1.3 转基因成分检测的方法 | 第13-25页 |
| 1.3.1 基于目的蛋白的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 基于核酸靶标的方法转基因检测的主要方法 | 第15-24页 |
| 1.3.2.1 转基因作物及产品的核酸提取、纯化 | 第15-18页 |
| 1.3.2.1.1 传统提取方法 | 第16页 |
| 1.3.2.1.2 核酸提取新方法 | 第16-17页 |
| 1.3.2.1.3 核酸 DNA 的浓度测定与评价 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 核酸标靶序列的富集方法 | 第18-22页 |
| 1.3.2.2.1 传统 PCR 方法 | 第18-19页 |
| 1.3.2.2.2 多重 PCR 方法 | 第19页 |
| 1.3.2.2.3 LAMP 方法 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2.4 Droplet PCR 技术 | 第20-22页 |
| 1.3.2.3 核酸靶标序列产物的检测方法 | 第22-24页 |
| 1.3.2.3.1 电泳方法 | 第22-23页 |
| 1.3.2.3.2 化学分析法 | 第23页 |
| 1.3.2.3.3 分子杂交方法 | 第23-24页 |
| 1.3.3 展望 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题研究的目的、内容及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 基于亲疏水微孔芯片技术的转基因成分高通量检测技术 | 第26-51页 |
| 2.1 实验材料、试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 主要的试剂、耗材 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要的仪器设备 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-34页 |
| 2.2.1 作物基因组 DNA 的提取与纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.2 DNA 的浓度测定与评价 | 第29页 |
| 2.2.3 亲疏水微孔芯片的制作及后续处理 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 芯片设计 | 第29页 |
| 2.2.3.2 芯片的制作 | 第29-30页 |
| 2.2.3.3 后续处理 | 第30页 |
| 2.2.4 特异性引物设计及点制 | 第30-32页 |
| 2.2.4.1 特异性引物的设计 | 第30-31页 |
| 2.2.4.2 引物在亲疏水性芯片上的点制 | 第31-32页 |
| 2.2.5 特异性探针设计及点制 | 第32页 |
| 2.2.5.1 特异性探针的设计 | 第32页 |
| 2.2.5.2 探针在 DNA 芯片上的点制 | 第32页 |
| 2.2.6 两次 PCR 扩增过程 | 第32-34页 |
| 2.2.6.1 芯片 PCR 过程 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 常规 PCR 过程 | 第33-34页 |
| 2.2.7 扩增产物的检测 | 第34页 |
| 2.2.8 检测结果的导出与分析 | 第34页 |
| 2.3 实验结果和分析 | 第34-48页 |
| 2.3.1 基于亲疏水微孔芯片的高通量检测体系 (MACRO) 的建立及流程 | 第34-36页 |
| 2.3.2 转基因特异性靶标序列的整理与最终检测范围的确定 | 第36-37页 |
| 2.3.3 特异性引物筛选及芯片 PCR 体系验证 | 第37-38页 |
| 2.3.4 特异性探针的筛选 | 第38-39页 |
| 2.3.5 体系特异性的实验结果和分析 | 第39-40页 |
| 2.3.6 体系灵敏度的实验结果和分析 | 第40-42页 |
| 2.3.7 实际样品的检测实验及结果 | 第42-46页 |
| 2.3.7.1 实际样品的分类及组成 | 第42-43页 |
| 2.3.7.2 样品的检测结果与相关验证 | 第43-46页 |
| 2.3.8 简单读取检测结果的软件开发 | 第46-48页 |
| 2.4 本章讨论与小结 | 第48-51页 |
| 第三章 基于微流控技术的转基因成分高通量检测 | 第51-67页 |
| 3.1 实验材料、试剂和仪器 | 第52-53页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第52页 |
| 3.1.2 常用的试剂 | 第52页 |
| 3.1.3 主要的仪器设备 | 第52-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-61页 |
| 3.2.1 作物基因组 DNA 的提取与纯化 | 第53页 |
| 3.2.2 DNA 的浓度测定与评价 | 第53页 |
| 3.2.3 微流控平台的建立 | 第53-55页 |
| 3.2.3.1 基于机械力驱动型的微流控平台 | 第53-54页 |
| 3.2.3.2 基于气压驱动型的微流控平台 | 第54-55页 |
| 3.2.4 微流控芯片的设计 | 第55-59页 |
| 3.2.4.1 T-junction 型芯片设计及试验 | 第56-58页 |
| 3.2.4.2 Focus-flowing 型芯片设计及试验 | 第58-59页 |
| 3.2.5 微滴生成试验 | 第59-60页 |
| 3.2.5.1 微滴生成操作及实时观察 | 第59-60页 |
| 3.2.5.2 微滴大小及生成速率的调控 | 第60页 |
| 3.2.6 微滴收集与 PCR 反应过程 | 第60-61页 |
| 3.2.6.1 微滴的收集和显微观察 | 第60-61页 |
| 3.3 实验结果 | 第61-66页 |
| 3.3.1 转基因特异性靶标序列的整理与甄选 | 第61页 |
| 3.3.2 微流控系统设计与生成微滴试验 | 第61-64页 |
| 3.3.2.1 T-junction 型芯片试验 | 第62-63页 |
| 3.3.2.2 Focus-flowing 型芯片试验 | 第63页 |
| 3.3.2.3 MFCS 微流体控制系统试验 | 第63-64页 |
| 3.3.3 微滴生成稳定性和微滴大小均匀性试验 | 第64-66页 |
| 3.3.3.1 影响微滴稳定性的因素总结 | 第64-65页 |
| 3.3.3.2 影响微滴大小的因素 | 第65-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第103页 |
