| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 CRISPR/Cas9系统及基因编辑羊的研究进展 | 第12-23页 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas9系统的发展简史 | 第12-13页 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas9系统的基因编辑类型 | 第13-15页 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9系统在羊上的研究 | 第16-22页 |
| 1.2.1 羊的相关功能基因的介绍 | 第17-18页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9系统在羊上的应用 | 第18-20页 |
| 1.2.3 基因编辑羊存在的问题 | 第20-22页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.3.1 降低基因编辑羊的脱靶效应 | 第22页 |
| 1.3.2 提高山羊的基因编辑效率和纯合率 | 第22-23页 |
| 第二章 山羊sgRNA设计的优化 | 第23-40页 |
| 2.1 方法 | 第24-30页 |
| 2.1.1 对比sgRNA设计软件 | 第24页 |
| 2.1.2 设计sgRNA | 第24页 |
| 2.1.3 sgRNA的筛选 | 第24-25页 |
| 2.1.4 构建U6-sgRNA载体 | 第25-26页 |
| 2.1.5 细胞药物筛选浓度的确定 | 第26-27页 |
| 2.1.6 U6-sgRNA和Cas9载体的转染 | 第27页 |
| 2.1.7 检测编辑效率 | 第27-28页 |
| 2.1.8 检测sg8脱靶效应 | 第28-29页 |
| 2.1.9 单克隆测序 | 第29-30页 |
| 2.2 结果与分析 | 第30-38页 |
| 2.2.1 sgRNA设计 | 第30-35页 |
| 2.2.2 稻瘟菌素和嘌呤霉素筛选浓度 | 第35-36页 |
| 2.2.3 sgRNA编辑效率的检测 | 第36-37页 |
| 2.2.4 脱靶效应检测 | 第37-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 山羊CRISPR系统微注射组分的优化 | 第40-52页 |
| 3.1 方法 | 第40-45页 |
| 3.1.1 供试羊处理 | 第40页 |
| 3.1.2 T7-sgRNA质粒构建 | 第40-41页 |
| 3.1.3 Cas9mRNA体外转录 | 第41-42页 |
| 3.1.4 sgRNA体外转录 | 第42页 |
| 3.1.5 配制微注射溶液 | 第42-43页 |
| 3.1.6 胚胎回收及显微注射 | 第43页 |
| 3.1.7 提取基因组DNA | 第43-44页 |
| 3.1.8 检测编辑效率 | 第44页 |
| 3.1.9 检测脱靶效应 | 第44页 |
| 3.1.10 检测编辑类型 | 第44-45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-50页 |
| 3.2.1 胚胎回收及分组 | 第45-47页 |
| 3.2.2 鉴定Cas9mRNA和sgRNA | 第47页 |
| 3.2.3 胚胎分裂率和编辑效率 | 第47-49页 |
| 3.2.4 编辑类型检测 | 第49-50页 |
| 3.2.5 脱靶效应检测 | 第50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-51页 |
| 3.4 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 基因编辑山羊打靶策略和效果的研究 | 第52-58页 |
| 4.1 方法 | 第52-54页 |
| 4.1.1 制备基因编辑羊 | 第52-53页 |
| 4.1.2 编辑效率检测 | 第53页 |
| 4.1.3 单克隆测序 | 第53-54页 |
| 4.2 结果与分析 | 第54-56页 |
| 4.2.1 羔羊存活数 | 第54页 |
| 4.2.2 编辑效率检测 | 第54页 |
| 4.2.3 编辑类型检测 | 第54-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-57页 |
| 4.4 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 5.1 研究结论 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58页 |
| 5.3 下一步研究内容 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 作者简介 | 第82页 |
