| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| List of abbreviations | 第10-22页 |
| 1 Introduction | 第22-36页 |
| 1.1 Research significance | 第22-24页 |
| 1.1.1 Wheat as a chief source of food | 第22页 |
| 1.1.2 Wheat production and demand | 第22-24页 |
| 1.2 Abiotic stresses | 第24-27页 |
| 1.2.1 Drought | 第24-25页 |
| 1.2.2 Salinity | 第25-27页 |
| 1.3 Research Background | 第27-34页 |
| 1.3.1 Transcription factors (TFs) | 第27-28页 |
| 1.3.2 NAC Transcription factors | 第28-30页 |
| 1.3.3 WRKY Transcription factors | 第30-34页 |
| 1.4 Research objectives | 第34-35页 |
| 1.5 Work layout | 第35-36页 |
| 2 Cloning and bioinformatics analysis of BeSNACl and BeWRKY2 genesfrom Bambusa emeiensis | 第36-65页 |
| 2.1 Testing materials,main instruments and reagents | 第36-38页 |
| 2.1.1 Testing materials | 第36页 |
| 2.1.2 Main instruments for testing | 第36-37页 |
| 2.1.3 Main reagents and other materials for testing | 第37页 |
| 2.1.4 Reagents and medium preparation | 第37-38页 |
| 2.2 Testing Methods | 第38-50页 |
| 2.2.1 Selection and cloning of genes | 第38页 |
| 2.2.2 Total RNA extraction | 第38-40页 |
| 2.2.3 cDNA synthesis via RT-PCR | 第40页 |
| 2.2.4 PCR amplification of coding sequence of BeSNAC1 &BeWRKY2 | 第40-42页 |
| 2.2.5 Validation of amplicons by Gel electrophoresis | 第42页 |
| 2.2.6 Purification of validated PCR amplicons | 第42-43页 |
| 2.2.7 Restriction digestion | 第43页 |
| 2.2.8 Vector and genes purification | 第43-45页 |
| 2.2.9 Ligation of purified amplicons to pMD19-T vector | 第45-46页 |
| 2.2.10 Transformation of recombinant plasmids intoEscherichia coli (DH5a) | 第46-47页 |
| 2.2.11 Blue-white screening | 第47页 |
| 2.2.12 PCR confirmation of target genes ligation | 第47-48页 |
| 2.2.13 Sequencing of genes | 第48页 |
| 2.2.14 Culture expansion and plasmids extraction | 第48-49页 |
| 2.2.15 Enzymatic validation of successful ligation | 第49-50页 |
| 2.3 Bioinformatics analysis of BeSNACl and BeWRKY2 genes | 第50-51页 |
| 2.3.1 The conserved motif analysis of BeSNACl and BeWRKY2 | 第50页 |
| 2.3.2 Multiple protein sequence alignment of BeSNAC1 andBeWRKY2 | 第50页 |
| 2.3.3 The phylogenetic analysis of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第50页 |
| 2.3.4 The domain structure analysis of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第50-51页 |
| 2.4 Results and Analysis | 第51-65页 |
| 2.4.1 Total RNA extraction | 第51-52页 |
| 2.4.2 PCR Amplification of BeSNACl and BeWRKY2 | 第52-53页 |
| 2.4.3 The enzymatic validation of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第53页 |
| 2.4.4 Sequencing results analysis | 第53-55页 |
| 2.4.5 Domain structure analysis of the BeSNAC1 | 第55-56页 |
| 2.4.6 Domain structure analysis of the BeWRKY2 | 第56-57页 |
| 2.4.7 Multiple protein Sequence alignment of BeSNAC1 | 第57-58页 |
| 2.4.8 Multiple protein Sequence alignment of BeWRKY2 | 第58-59页 |
| 2.4.9 Phylogenetic analysis of BeSNAC1 | 第59-61页 |
| 2.4.10 Phylogenetic analysis of BeWRKY2 | 第61-63页 |
| 2.4.11 The conserved domain structure of BeSNACl | 第63-64页 |
| 2.4.12 The conserved domain structure of BeWRKY2 | 第64-65页 |
| 3 Yeast one-hybrid screening of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第65-81页 |
| 3.1 Testing materials, main instruments and reagents | 第65-69页 |
| 3.1.1 Materials for testing | 第65页 |
| 3.1.2 Main instruments for testing | 第65页 |
| 3.1.3 Reagents and other materials | 第65-66页 |
| 3.1.4 Main reagents preparation | 第66-69页 |
| 3.2 Testing methods | 第69-76页 |
| 3.2.1 PCR amplification of BeSNACl and BeWRKY2 | 第69-70页 |
| 3.2.2 Gel electrophoresis validation of PCR amplicons | 第70页 |
| 3.2.3 Purification of validated PCR amplicons | 第70页 |
| 3.2.4 Restriction digestion | 第70-71页 |
| 3.2.5 Vector and genes purification | 第71页 |
| 3.2.6 Ligation of genes with pEG202 | 第71页 |
| 3.2.7 Transformation of recombinant plasmids into Escherichiacoli (DH5α) | 第71-72页 |
| 3.2.8 Escherichia coli (DH5a) culture | 第72页 |
| 3.2.9 PCR confirmation of target gene ligation | 第72-73页 |
| 3.2.10 Culture expansion and plasmids extraction | 第73-74页 |
| 3.2.11 Enzymatic validation | 第74页 |
| 3.2.12 Yeast EGY-48 Competent cells Preparation and Yeasttransformation | 第74-75页 |
| 3.2.13 PCR validation of target genes | 第75-76页 |
| 3.3 Results and Analysis | 第76-81页 |
| 3.3.1 The PCR amplification of BeSNAC1 and Be WRKY2 | 第76-77页 |
| 3.3.2 Restriction digestion and ligation | 第77-78页 |
| 3.3.3 Enzymatic validation | 第78-79页 |
| 3.3.4 RCR validation of target genes in yeast | 第79-80页 |
| 3.3.5 Transcriptional activity analysis of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第80-81页 |
| 4 Sub-Cellular localization analysis BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第81-96页 |
| 4.1 Testing materials, main instruments and reagents | 第81-84页 |
| 4.1.1 Materials for testing | 第81页 |
| 4.1.2 Main instruments for testing | 第81页 |
| 4.1.3 Main reagents and other materials | 第81-82页 |
| 4.1.4 Main reagents and medium preparation | 第82-84页 |
| 4.2 Testing methods | 第84-91页 |
| 4.2.1 PCR amplification of BeSNAC1 and BeWRKY2 | 第84-85页 |
| 4.2.2 Gel electrophoresis validation of PCR amplicons | 第85页 |
| 4.2.3 Purification of validated PCR amplicons | 第85页 |
| 4.2.4 Restriction digestion | 第85-86页 |
| 4.2.5 Vector and genes purification | 第86页 |
| 4.2.6 Ligation of genes with pTEX-GFP | 第86页 |
| 4.2.7 Insertion of the vector into Escherichia coli (DH5α) | 第86-87页 |
| 4.2.8 Escherichia coli (DH5α) culture | 第87页 |
| 4.2.9 PCR confirmation of target genes ligation | 第87-88页 |
| 4.2.10 Culture expansion and plasmids extraction | 第88页 |
| 4.2.11 Enzymatic validation | 第88页 |
| 4.2.12 The onion epidermal cells preparation | 第88-89页 |
| 4.2.13 Gold preparation | 第89页 |
| 4.2.14 Coating plasmids with gold | 第89-90页 |
| 4.2.15 Transformation using particles delivery system | 第90页 |
| 4.2.16 Microscopic analysis | 第90-91页 |
| 4.3 Results and Analysis | 第91-96页 |
| 4.3.1 The gel electrophoresis validation of PCR amplicons | 第91-92页 |
| 4.3.2 Restriction digestion and ligation | 第92-93页 |
| 4.3.3 Enzymatic validation | 第93-94页 |
| 4.3.4 Subcellular localization of BeSNACl and BeWRKY2 | 第94-96页 |
| 5 The expression pattern analysis of BeSNAC1 and BeWRKY2 of Bambusaemeiensis | 第96-107页 |
| 5.1 Testing materials, main instruments and reagents | 第96-97页 |
| 5.1.1 Testing materials | 第96页 |
| 5.1.2 Main instruments for testing | 第96页 |
| 5.1.3 Main reagents and other materials for testing | 第96页 |
| 5.1.4 Reagents preparation | 第96-97页 |
| 5.2 Testing methods | 第97-101页 |
| 5.2.1 Plant materials and stress treatments | 第97-98页 |
| 5.2.2 Total RNA extraction | 第98页 |
| 5.2.3 cDNA synthesis via RT-PCR | 第98页 |
| 5.2.4 The qRT-PCR primers | 第98-99页 |
| 5.2.5 Real-time PCR Primers specificity detection | 第99-100页 |
| 5.2.6 Expression pattern analysis of BeSNACl and BeWRKY2 byQuantitative Real-time PCR (qRT-PCR) | 第100页 |
| 5.2.7 Statistical analysis | 第100-101页 |
| 5.3 Results and Analysis | 第101-107页 |
| 5.3.1 Gel electrophoresis analysis of Total RNA | 第101-102页 |
| 5.3.2 The qRT-PCR primers specificity detection | 第102-103页 |
| 5.3.3 Expression pattern analysis of BeSNACl via quantitativeReal-time PCR (qRT-PCR) | 第103-105页 |
| 5.3.4 Expression pattern analysis of BeWRKY2 via quantitativeReal-time PCR (qRT-PCR) | 第105-107页 |
| 6 Construction of overexpression vector, wheat transformation andvalidation of overexpressed plants | 第107-129页 |
| 6.1 Testing materials, main instruments and reagents | 第107-110页 |
| 6.1.1 Testing materials | 第107页 |
| 6.1.2 Main instruments for testing | 第107页 |
| 6.1.3 Main reagents and other materials for testing | 第107-108页 |
| 6.1.4 Reagents and mediums preparation | 第108-110页 |
| 6.2 Testing methods | 第110-121页 |
| 6.2.1 Overexpression vector construction | 第110-115页 |
| 6.2.2 Ex-plant preparation and Callus induction | 第115-116页 |
| 6.2.3 Gold preparation | 第116页 |
| 6.2.4 Coating overexpression vectors with gold | 第116页 |
| 6.2.5 Osmotic treatment and transformation | 第116-117页 |
| 6.2.6 Validation and overexpression analysis of target genes intransformed plants | 第117-121页 |
| 6.3 Results and Analysis | 第121-129页 |
| 6.3.1 The gel electrophoresis validation of PCR amplicons | 第121-122页 |
| 6.3.2 Restriction digestion and ligation | 第122-123页 |
| 6.3.3 Enzymatic validation | 第123-124页 |
| 6.3.4 Callus induction and regeneration of seedlings bombardedwith BeSNACl | 第124-125页 |
| 6.3.5 Callus induction and regeneration of seedlings bombardedwith BeWRKY2 | 第125-126页 |
| 6.3.6 Validation and overexpression analysis of BeSNACl intransformed plants | 第126-127页 |
| 6.3.7 Validation and Overexpression analysis of BeWRKY2 intransformed plants | 第127-128页 |
| 6.3.8 Ti generation of BeSNACl and BeWRKY2 overexpressedplants | 第128-129页 |
| 7 Discussion and Conclusion | 第129-135页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第135-136页 |
| DEDICATION | 第136-137页 |
| References | 第137-146页 |
| Academic papers and research findings | 第146页 |
