英文缩略词 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9页 |
1 前言 | 第10-26页 |
1.1 猪肌肉组织 | 第10页 |
1.2 猪骨骼肌组织 | 第10-15页 |
1.2.1 猪骨骼肌结构 | 第10-12页 |
1.2.2 猪骨骼肌纤维分类 | 第12-14页 |
1.2.3 肌纤维类型与肉品质的关系 | 第14-15页 |
1.3 肌球蛋白与肌球蛋白重链 | 第15-16页 |
1.3.1 肌球蛋白 | 第15-16页 |
1.3.2 肌球蛋白重链 | 第16页 |
1.4 肌生成的分子调控机制 | 第16-25页 |
1.4.1 形态发育和肌肉发育 | 第17-20页 |
1.4.2 基因网络调控肌生成 | 第20-25页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
2 实验材料和方法 | 第26-43页 |
2.1 实验材料 | 第26-30页 |
2.1.1 实验动物及其处理 | 第26页 |
2.1.2 主要实验仪器 | 第26-27页 |
2.1.3 主要试剂及来源 | 第27-28页 |
2.1.4 主要数据库及生物软件 | 第28页 |
2.1.5 常用试剂的配制 | 第28-30页 |
2.2 试验方法 | 第30-43页 |
2.2.1 试验中用到的引物序列 | 第30页 |
2.2.2 总 RNA 的提取和反转录 | 第30-32页 |
2.2.2.1 前处理 | 第30页 |
2.2.2.2 组织总 RNA 提取与纯化(Trizol 法) | 第30-31页 |
2.2.2.3 RNA 品质和质量检测 | 第31页 |
2.2.2.4 Dnase I 处理 | 第31-32页 |
2.2.2.5 RNA 的反转录以得到 cDNA | 第32页 |
2.2.3 实时荧光定量 PCR | 第32页 |
2.2.4 MyHC-IIb 启动子区的克隆及多态性分析 | 第32-34页 |
2.2.4.1 MyHC-IIb 启动子区的克隆 | 第32-33页 |
2.2.4.2 MyHC-IIb 启动子区的多态性分析 | 第33-34页 |
2.2.5 表达载体构建及质粒的去内毒素处理 | 第34-37页 |
2.2.5.1 表达载体构建 | 第35-36页 |
2.2.5.2 质粒的去内毒素处理 | 第36-37页 |
2.2.6 C2C12 细胞培养 | 第37页 |
2.2.6.1 C2C12 细胞的复苏 | 第37页 |
2.2.6.2 C2C12 细胞的消化传代 | 第37页 |
2.2.6.3 C2C12 细胞的冻存 | 第37页 |
2.2.7 转染及 Dual-Luciferase 报告基因检测 | 第37-38页 |
2.2.7.1 细胞转染 | 第37-38页 |
2.2.7.2 Dual-Luciferase 报告基因检测 | 第38页 |
2.2.8 总蛋白的提取和蛋白浓度检测 | 第38-39页 |
2.2.8.1 总蛋白的提取 | 第38-39页 |
2.2.8.2 蛋白浓度检测 | 第39页 |
2.2.9 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Western blot) | 第39-41页 |
2.2.9.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第39-40页 |
2.2.9.2 蛋白质印迹(Westernblot)分析 | 第40-41页 |
2.2.10 统计分析 | 第41-43页 |
3 结果与分析 | 第43-53页 |
3.1 总 RNA 提取 | 第43页 |
3.2 莱芜猪和长白猪背最长肌中 MyHC-IIb mRNA 表达水平对比 | 第43-45页 |
3.3 MyHC-IIb 启动子区的克隆及区多态性分析 | 第45-46页 |
3.3.1 MyHC-IIb 启动子区的克隆 | 第45页 |
3.3.2 MyHC-IIb 启动子区多态性分析 | 第45-46页 |
3.4 C2C12 细胞的培养 | 第46-47页 |
3.5 SNP 位点突变载体荧光素酶报告基因检测结果 | 第47-48页 |
3.6 MyHC-IIb 启动子不同长度片段载体的构建及细胞转染结果 | 第48-49页 |
3.6.1 MyHC-IIb 启动子不同长度片段载体的构建 | 第48-49页 |
3.6.2 MyHC-IIb 启动子区删除实验结果 | 第49页 |
3.7 E-box 突变载体荧光素酶报告基因检测结果 | 第49-50页 |
3.8 总蛋白的提取和蛋白浓度检测 | 第50-51页 |
3.9 蛋白质印迹分析(Westernblot) | 第51-53页 |
4 讨论 | 第53-55页 |
5 结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-70页 |
致谢 | 第70页 |