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猪骨骼肌MyHC-Ⅱb基因上调表达的分子机制研究

英文缩略词第4-8页
中文摘要第8-9页
Abstract第9页
1 前言第10-26页
    1.1 猪肌肉组织第10页
    1.2 猪骨骼肌组织第10-15页
        1.2.1 猪骨骼肌结构第10-12页
        1.2.2 猪骨骼肌纤维分类第12-14页
        1.2.3 肌纤维类型与肉品质的关系第14-15页
    1.3 肌球蛋白与肌球蛋白重链第15-16页
        1.3.1 肌球蛋白第15-16页
        1.3.2 肌球蛋白重链第16页
    1.4 肌生成的分子调控机制第16-25页
        1.4.1 形态发育和肌肉发育第17-20页
        1.4.2 基因网络调控肌生成第20-25页
    1.5 本研究的目的和意义第25-26页
2 实验材料和方法第26-43页
    2.1 实验材料第26-30页
        2.1.1 实验动物及其处理第26页
        2.1.2 主要实验仪器第26-27页
        2.1.3 主要试剂及来源第27-28页
        2.1.4 主要数据库及生物软件第28页
        2.1.5 常用试剂的配制第28-30页
    2.2 试验方法第30-43页
        2.2.1 试验中用到的引物序列第30页
        2.2.2 总 RNA 的提取和反转录第30-32页
            2.2.2.1 前处理第30页
            2.2.2.2 组织总 RNA 提取与纯化(Trizol 法)第30-31页
            2.2.2.3 RNA 品质和质量检测第31页
            2.2.2.4 Dnase I 处理第31-32页
            2.2.2.5 RNA 的反转录以得到 cDNA第32页
        2.2.3 实时荧光定量 PCR第32页
        2.2.4 MyHC-IIb 启动子区的克隆及多态性分析第32-34页
            2.2.4.1 MyHC-IIb 启动子区的克隆第32-33页
            2.2.4.2 MyHC-IIb 启动子区的多态性分析第33-34页
        2.2.5 表达载体构建及质粒的去内毒素处理第34-37页
            2.2.5.1 表达载体构建第35-36页
            2.2.5.2 质粒的去内毒素处理第36-37页
        2.2.6 C2C12 细胞培养第37页
            2.2.6.1 C2C12 细胞的复苏第37页
            2.2.6.2 C2C12 细胞的消化传代第37页
            2.2.6.3 C2C12 细胞的冻存第37页
        2.2.7 转染及 Dual-Luciferase 报告基因检测第37-38页
            2.2.7.1 细胞转染第37-38页
            2.2.7.2 Dual-Luciferase 报告基因检测第38页
        2.2.8 总蛋白的提取和蛋白浓度检测第38-39页
            2.2.8.1 总蛋白的提取第38-39页
            2.2.8.2 蛋白浓度检测第39页
        2.2.9 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Western blot)第39-41页
            2.2.9.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第39-40页
            2.2.9.2 蛋白质印迹(Westernblot)分析第40-41页
        2.2.10 统计分析第41-43页
3 结果与分析第43-53页
    3.1 总 RNA 提取第43页
    3.2 莱芜猪和长白猪背最长肌中 MyHC-IIb mRNA 表达水平对比第43-45页
    3.3 MyHC-IIb 启动子区的克隆及区多态性分析第45-46页
        3.3.1 MyHC-IIb 启动子区的克隆第45页
        3.3.2 MyHC-IIb 启动子区多态性分析第45-46页
    3.4 C2C12 细胞的培养第46-47页
    3.5 SNP 位点突变载体荧光素酶报告基因检测结果第47-48页
    3.6 MyHC-IIb 启动子不同长度片段载体的构建及细胞转染结果第48-49页
        3.6.1 MyHC-IIb 启动子不同长度片段载体的构建第48-49页
        3.6.2 MyHC-IIb 启动子区删除实验结果第49页
    3.7 E-box 突变载体荧光素酶报告基因检测结果第49-50页
    3.8 总蛋白的提取和蛋白浓度检测第50-51页
    3.9 蛋白质印迹分析(Westernblot)第51-53页
4 讨论第53-55页
5 结论第55-56页
参考文献第56-70页
致谢第70页

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