| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1.1 肿瘤免疫逃逸的介绍 | 第13-14页 |
| 1.2 肿瘤免疫治疗的介绍 | 第14-16页 |
| 1.3 PD-1蛋白的介绍 | 第16-17页 |
| 1.4 调节性T细胞 | 第17-22页 |
| 1.4.1 调节性T细胞的概述 | 第17-18页 |
| 1.4.2 诱导性调节T细胞的体外诱导 | 第18-19页 |
| 1.4.3 调节性T细胞抑制机制的分析 | 第19-20页 |
| 1.4.4 调节性T细胞与PD-1关系的介绍 | 第20-21页 |
| 1.4.5 逆转调节性T细胞的抑制作用总结 | 第21-22页 |
| 1.5 MDSC的概述 | 第22-25页 |
| 1.5.1 MDSC的来源 | 第22-23页 |
| 1.5.2 MDSC的标记及抑制机制 | 第23-24页 |
| 1.5.3 MDSC功能的抵制及靶点药概述 | 第24-25页 |
| 1.6 肿瘤细胞通过过度甲基化逃脱免疫识别机制 | 第25-30页 |
| 1.6.1 肿瘤细胞可通过甲基化作用降低抗原的表达与递呈 | 第25-26页 |
| 1.6.2 去甲基化药物可提高肿瘤抗原的表达 | 第26-27页 |
| 1.6.3 去甲基化药物可使肿瘤细胞发生凋亡 | 第27-28页 |
| 1.6.4 去甲基化药物对效应T细胞的作用 | 第28-29页 |
| 1.6.5 去甲基化药物与其他治疗方法联和治疗肿瘤 | 第29-30页 |
| 1.7 免疫动员抗肿瘤单克隆TCR的介绍 | 第30-31页 |
| 1.8 课题概述 | 第31-34页 |
| 1.8.1 研究目的及意义 | 第31-32页 |
| 1.8.2 研究内容总结 | 第32-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-58页 |
| 2.1 研究方法及路线图概述 | 第34页 |
| 2.2 细胞培养 | 第34-37页 |
| 2.2.1 试剂耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.3 贴壁细胞的消化与传代 | 第35-36页 |
| 2.2.4 悬浮细胞的培养与传代 | 第36页 |
| 2.2.5 细胞冻存 | 第36页 |
| 2.2.6 细胞复苏 | 第36-37页 |
| 2.2.7 细胞计数 | 第37页 |
| 2.3 Ficoll密度梯度离心法分离外周血PBMC | 第37-38页 |
| 2.3.1 试剂耗材 | 第37页 |
| 2.3.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 2.4 CD45RA~+CD4~+CD25~-T细胞的分选 | 第38-39页 |
| 2.4.1 实验试剂与耗材 | 第38页 |
| 2.4.2 仪器设备 | 第38页 |
| 2.4.3 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.5 nTreg细胞的磁珠分选 | 第39-40页 |
| 2.5.1 实验试剂 | 第39页 |
| 2.5.2 仪器设备 | 第39页 |
| 2.5.3 试验方法 | 第39-40页 |
| 2.6 nTreg细胞的活化刺激及扩增 | 第40-41页 |
| 2.6.1 试剂与耗材 | 第40页 |
| 2.6.2 仪器设备 | 第40-41页 |
| 2.6.3 试验方法 | 第41页 |
| 2.7 iTreg细胞的体外诱导 | 第41-42页 |
| 2.7.1 实验试剂 | 第41页 |
| 2.7.2 仪器设备 | 第41页 |
| 2.7.3 实验方法 | 第41-42页 |
| 2.7.4 实验方法讨论 | 第42页 |
| 2.8 流式检测 | 第42-44页 |
| 2.8.1 试剂与耗材 | 第42-43页 |
| 2.8.2 仪器设备 | 第43页 |
| 2.8.3 试验方法 | 第43-44页 |
| 2.8.4 实验方法讨论 | 第44页 |
| 2.9 粒细胞及MDSC细胞的流式分选 | 第44-45页 |
| 2.9.1 试剂与耗材 | 第44页 |
| 2.9.2 仪器设备 | 第44-45页 |
| 2.9.3 试验方法 | 第45页 |
| 2.9.4 实验方法讨论 | 第45页 |
| 2.10 CFSE细胞增值实验 | 第45-46页 |
| 2.10.1 实验试剂与耗材 | 第45页 |
| 2.10.2 仪器设备 | 第45页 |
| 2.10.3 实验方法 | 第45-46页 |
| 2.10.4 实验方法讨论 | 第46页 |
| 2.11 ELISA实验 | 第46-47页 |
| 2.11.1 实验试剂 | 第46页 |
| 2.11.2 实验仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.11.3 实验方法 | 第47页 |
| 2.12 Elispot实验 | 第47-48页 |
| 2.12.1 实验试剂 | 第48页 |
| 2.12.2 仪器设备 | 第48页 |
| 2.12.3 实验方法 | 第48页 |
| 2.13 细胞杀伤实验 | 第48-50页 |
| 2.13.1 实验试剂与耗材 | 第48-49页 |
| 2.13.2 仪器设备 | 第49页 |
| 2.13.3 实验方法 | 第49-50页 |
| 2.14 RNA提取 | 第50-51页 |
| 2.14.1 试剂与耗材 | 第50页 |
| 2.14.2 仪器设备 | 第50页 |
| 2.14.3 实验方法 | 第50-51页 |
| 2.15 RNA的鉴定 | 第51页 |
| 2.15.1 试剂与耗材 | 第51页 |
| 2.15.2 仪器设备 | 第51页 |
| 2.15.3 实验方法 | 第51页 |
| 2.16 RNA的逆转录 | 第51-52页 |
| 2.16.1 实验试剂 | 第51页 |
| 2.16.2 仪器设备 | 第51页 |
| 2.16.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 2.17 实时荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 2.17.1 实验试剂 | 第52页 |
| 2.17.2 仪器设备 | 第52页 |
| 2.17.3 引物序列 | 第52页 |
| 2.17.4 实验方法 | 第52-53页 |
| 2.18 Western Blotting | 第53-55页 |
| 2.18.1 试剂耗材名称 | 第53页 |
| 2.18.2 主要试剂配置 | 第53-54页 |
| 2.18.3 仪器设备 | 第54页 |
| 2.18.4 试验方法 | 第54-55页 |
| 2.19 流式检测ROS及NO的表达 | 第55-57页 |
| 2.19.1 实验试剂与耗材 | 第55-56页 |
| 2.19.2 仪器设备 | 第56页 |
| 2.19.3 实验方法 | 第56页 |
| 2.19.4 实验方法讨论 | 第56-57页 |
| 2.20 去甲基化药物与肿瘤细胞孵育的方法 | 第57页 |
| 2.20.1 试剂与耗材 | 第57页 |
| 2.20.2 仪器设备 | 第57页 |
| 2.20.3 实验方法 | 第57页 |
| 2.20.4 实验方法讨论 | 第57页 |
| 2.21 数据分析 | 第57-58页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第58-94页 |
| 3.1 ImmTAC分子功能验证 | 第58-59页 |
| 3.2 肺癌细胞株NCI-H1299的表型鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3 Treg细胞对ImmTAC分子功能的影响 | 第60-77页 |
| 3.3.1 nTreg细胞对ImmTAC分子功能的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2 iTreg细胞的体外诱导条件优化 | 第61-63页 |
| 3.3.3 iTreg细胞的体外诱导 | 第63页 |
| 3.3.4 iTreg细胞中细胞因子的分泌及受体表达 | 第63-64页 |
| 3.3.5 iTreg细胞可抑制CD8~+T细胞的增殖 | 第64-65页 |
| 3.3.6 iTreg细胞可抑制ImmTAC分子的功能 | 第65-66页 |
| 3.3.7 iTreg细胞可抑制ImmTAC分子介导的CD8~+T细胞的增殖 | 第66-67页 |
| 3.3.8 iTreg细胞可抑制CD8~+T细胞表达CD25及CD107a | 第67-68页 |
| 3.3.9 iTreg细胞可抑制CD8~+T细胞表达穿孔素及颗粒酶B | 第68页 |
| 3.3.10 iTreg细胞的抑制作用需要细胞与细胞之间的接触 | 第68-69页 |
| 3.3.11 含有高亲和性TCR的ImmTAC分子可抵制iTreg的抑制 | 第69-71页 |
| 3.3.12 anti-PD-1 mAb可抵制iTreg对ImmTAC功能的抑制作用 | 第71-73页 |
| 3.3.13 anti-PD-1 mAb可降低iTreg细胞中FoxP3的表达 | 第73页 |
| 3.3.14 肺癌病人中的CD4~+Treg细胞可抑制ImmTAC的功能 | 第73-74页 |
| 3.3.15 anti-PD-1 mAb与ImmTAC联合的作用适用于肺癌病人 | 第74-76页 |
| 3.3.16 结论 | 第76-77页 |
| 3.4 MDSC抑制ImmTAC功能的机制及解决方法 | 第77-87页 |
| 3.4.1 肺癌病人中的粒细胞可抑制ImmTAC的功能 | 第77-78页 |
| 3.4.2 肺癌病人外周血中含有高比例的CD11b~+HLA-DR~-MDSC细胞 | 第78-81页 |
| 3.4.3 肺癌病人血清中含有促进MDSC形成的细胞因子 | 第81页 |
| 3.4.4 MDSC可抑制ImmTAC介导的肿瘤杀伤作用 | 第81-82页 |
| 3.4.5 MDSC抑制ImmTAC介导肿瘤杀伤的机制 | 第82-85页 |
| 3.4.6 Gemcitabine可抵抗MDSC对ImmTAC的功能抑制作用 | 第85-87页 |
| 3.4.7 结论 | 第87页 |
| 3.5 去甲基化药物与ImmTAC联合抗肿瘤作用机制研究 | 第87-94页 |
| 3.5.1 两种去甲基化药物作用效果的比较 | 第87-88页 |
| 3.5.2 Decitabine可增加肿瘤细胞HLA-A~*2的表达 | 第88-89页 |
| 3.5.3 qRT-PCR验证NY-ESO-1引物的特异性 | 第89-90页 |
| 3.5.4 Decitabine可增加肿瘤细胞抗原的表达 | 第90-91页 |
| 3.5.5 Decitabine可增加肿瘤细胞抗原的递呈 | 第91-92页 |
| 3.5.6 Decitabine可增加ImmTAC重定向T细胞杀伤肿瘤细胞的能力 | 第92-93页 |
| 3.5.7 结论 | 第93-94页 |
| 第四章 讨论 | 第94-97页 |
| 4.1 讨论 | 第94-97页 |
| 缩略表 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第111页 |
