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两型囊泡膜谷氨酸转运体VGLUT在口面部感觉传导路中的表达及其功能研究

缩略语表第7-10页
中文摘要第10-14页
Abstract第14-19页
前言第20-22页
文献回顾第22-51页
    第一部分 谷氨酸在口面部感觉信息传递过程中发挥重要作用第22-27页
    第二部分 囊泡膜谷氨酸转运体 VGLUT 的克隆及其重要功能意义第27-30页
    第三部分 两型囊泡膜谷氨酸转运体 VGLUT1 与 VGLUT2 在神经系统内呈互补分布第30-39页
    第四部分 VGLUT1 和 VGLUT2 在感觉传导路中的分布第39-44页
    第五部分 VGLUT1 和 VGLUT2 可能具有的功能学差异第44-51页
第一部分 口面部初级感觉信息传递通路内两型 VGLUT 的表达第51-62页
    1 材料第51-52页
        1.1 动物第51页
        1.2 神经束路示踪剂第51页
        1.3 抗体第51页
        1.4 主要仪器第51-52页
    2 方法第52-55页
        2.1 VGLUT1 与 VGLUT2 的免疫组织化学染色第52页
        2.2 VGLUT1、VGLUT2 与 NeuN 的免疫荧光多重标记技术第52-53页
        2.3 三叉神经感觉根切断手术第53页
        2.4 三叉神经感觉复合体内外周来源初级感觉传入纤维终末的跨节示踪第53页
        2.5 标记终末内 CTB/WGA-HRP、VGLUTs 以及 NeuN 的免疫荧光三重标记第53-54页
        2.6 标记终末内 CTB 与 VGLUTs 的免疫电镜双重标记第54-55页
    3 结果第55-59页
        3.1 三叉神经感觉复合体(TSNC)各亚核内 VGLUT1 与 VGLUT2 阳性终末的分布与共存分析第55-56页
        3.2 切除三叉神经感觉根后对三叉神经感觉复合体内 VGLUT1 和 VGLUT2 阳性纤维终末密度的影响第56-57页
        3.3 外周注射 CTB 后 TSNC 内 CTB 标记的阳性纤维终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 的表达第57-58页
        3.4 外周注射 WGA-HRP 后 TSNC 内 WGA-HRP 标记的阳性纤维终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 的表达第58页
        3.5 外周注射 CTB 后 TSNC 内 CTB 阳性免疫物质与 VGLUT1 与 VGLUT2 电镜共存分析第58-59页
    4 讨论第59-62页
第二部分 TSNC 传出投射-口面部二级感觉传导通路-内两型 VGLUTs 的表达第62-79页
    1 材料第62-63页
        1.1 动物第62页
        1.2 神经束路示踪剂第62页
        1.3 原位分子杂交试剂第62页
        1.4 抗体第62-63页
        1.5 主要仪器第63页
    2 方法第63-68页
        2.1 荧光双重原位分子杂交(dual FISH)第63-64页
        2.2 束路追踪剂 CTb/BDA 的脑内核团立体定向注射第64页
        2.3 注射区的显示-CTB/BDA 和 NeuN 的免疫荧光双重标记第64-65页
        2.4 标记终末内 CTB/BDA、VGLUTs 和 NeuN 的免疫荧光三重标记第65-66页
        2.5 标记终末内 CTB、VGLUT1 以及 VGLUT2 的免疫荧光三重标记第66页
        2.6 标记终末内 CTB/BDA 与 VGLUTs 的免疫电镜双重标记第66-67页
        2.7 利用 FG 的逆行束路追踪以及注射区的显示第67页
        2.8 逆标神经元内 FG 的免疫荧光结合 VGLUT1 mRNA 或 VGLUT2 mRNA 的荧光原位分子杂交双重检测第67-68页
    3 结果第68-76页
        3.1 TSNC 各亚核内 VGLUT1 mRNA 与 VGLUT2 mRNA 的分布以及共存分析第68-69页
        3.2 三叉神经感觉主核向丘脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达第69-70页
        3.3 三叉神经脊束核各亚核向丘脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达第70-71页
        3.4 三叉神经脊束核尾侧亚核 Vc 向臂旁核的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达第71页
        3.5 三叉神经感觉复合体各亚核向小脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达第71-72页
        3.6 TSNC 内向丘脑投射的神经元内 VGLUT1 mRNA 以及 VGLUT2 mRNA 的表达第72-74页
        3.7 TSNC 内向小脑投射的神经元内 VGLUT1 mRNA 以及 VGLUT2 mRNA 的表达第74-75页
        3.8 TSNC 传出投射神经终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 表达类型的电镜分析·第75-76页
    4 讨论第76-79页
第三部分 下调延髓背角内 VGLUT2 对口面部痛信息传递的影响第79-91页
    1 材料第79-80页
        1.1 动物第79页
        1.2 质粒、限制性内切酶第79页
        1.3 细胞培养液及转染试剂第79页
        1.4 抗体第79页
        1.5 蛋白印记实验试剂第79页
        1.6 荧光原位分子杂交试剂第79-80页
        1.7 主要仪器第80页
    2 方法第80-85页
        2.1 携带报告基因的大鼠 VGLUT2 表达质粒的构建第80页
        2.2 针对 VGLUT2 的 siRNA 的设计和体外筛选第80-81页
        2.3 表达 VGLUT2shRNA 的慢病毒载体的包装第81-82页
        2.4 大鼠皮层神经元原代培养和慢病毒的感染第82页
        2.5 感染后神经元的免疫荧光染色第82-83页
        2.6 感染后神经元的 VGLUT2 表达量的 Western Blotting 检测第83页
        2.7 大鼠延髓背角内注射表达 VGLUT2 shRNA 及 VGLUT2 shcontrol 的慢病毒载体第83页
        2.8 大鼠痛行为变化的检测第83-84页
        2.9 利用 GFP 的加强免疫荧光染色结合 VGLUT2 mRNA 的荧光原位分子杂交检测注射慢病毒后大鼠延髓背角内 VGLUT2 mRNA 的表达下调第84页
        2.10 统计学处理第84-85页
    3 结果第85-89页
        3.1 体外成功筛选到高效下调 VGLUT2 的 siRNA 干扰序列第85-86页
        3.2 成功包装得到表达 VGLUT2 shRNA 的慢病毒载体,并对原代培养大鼠皮层神经元内 VGLUT2 的表达实现有效下调第86-87页
        3.3 将表达 VGLUT2 shRNA 的慢病毒注射入大鼠延髓背角,成功下调大鼠延髓背角内 VGLUT2 mRNA 的表达第87-88页
        3.4 延髓背角神经元感染慢病毒对大鼠口面部痛行为指标的影响第88-89页
    4 讨论第89-91页
小结第91-92页
参考文献第92-104页
附录第104-105页
个人简历和研究成果第105-107页
致谢第107页

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