缩略语表 | 第7-10页 |
中文摘要 | 第10-14页 |
Abstract | 第14-19页 |
前言 | 第20-22页 |
文献回顾 | 第22-51页 |
第一部分 谷氨酸在口面部感觉信息传递过程中发挥重要作用 | 第22-27页 |
第二部分 囊泡膜谷氨酸转运体 VGLUT 的克隆及其重要功能意义 | 第27-30页 |
第三部分 两型囊泡膜谷氨酸转运体 VGLUT1 与 VGLUT2 在神经系统内呈互补分布 | 第30-39页 |
第四部分 VGLUT1 和 VGLUT2 在感觉传导路中的分布 | 第39-44页 |
第五部分 VGLUT1 和 VGLUT2 可能具有的功能学差异 | 第44-51页 |
第一部分 口面部初级感觉信息传递通路内两型 VGLUT 的表达 | 第51-62页 |
1 材料 | 第51-52页 |
1.1 动物 | 第51页 |
1.2 神经束路示踪剂 | 第51页 |
1.3 抗体 | 第51页 |
1.4 主要仪器 | 第51-52页 |
2 方法 | 第52-55页 |
2.1 VGLUT1 与 VGLUT2 的免疫组织化学染色 | 第52页 |
2.2 VGLUT1、VGLUT2 与 NeuN 的免疫荧光多重标记技术 | 第52-53页 |
2.3 三叉神经感觉根切断手术 | 第53页 |
2.4 三叉神经感觉复合体内外周来源初级感觉传入纤维终末的跨节示踪 | 第53页 |
2.5 标记终末内 CTB/WGA-HRP、VGLUTs 以及 NeuN 的免疫荧光三重标记 | 第53-54页 |
2.6 标记终末内 CTB 与 VGLUTs 的免疫电镜双重标记 | 第54-55页 |
3 结果 | 第55-59页 |
3.1 三叉神经感觉复合体(TSNC)各亚核内 VGLUT1 与 VGLUT2 阳性终末的分布与共存分析 | 第55-56页 |
3.2 切除三叉神经感觉根后对三叉神经感觉复合体内 VGLUT1 和 VGLUT2 阳性纤维终末密度的影响 | 第56-57页 |
3.3 外周注射 CTB 后 TSNC 内 CTB 标记的阳性纤维终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 的表达 | 第57-58页 |
3.4 外周注射 WGA-HRP 后 TSNC 内 WGA-HRP 标记的阳性纤维终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 的表达 | 第58页 |
3.5 外周注射 CTB 后 TSNC 内 CTB 阳性免疫物质与 VGLUT1 与 VGLUT2 电镜共存分析 | 第58-59页 |
4 讨论 | 第59-62页 |
第二部分 TSNC 传出投射-口面部二级感觉传导通路-内两型 VGLUTs 的表达 | 第62-79页 |
1 材料 | 第62-63页 |
1.1 动物 | 第62页 |
1.2 神经束路示踪剂 | 第62页 |
1.3 原位分子杂交试剂 | 第62页 |
1.4 抗体 | 第62-63页 |
1.5 主要仪器 | 第63页 |
2 方法 | 第63-68页 |
2.1 荧光双重原位分子杂交(dual FISH) | 第63-64页 |
2.2 束路追踪剂 CTb/BDA 的脑内核团立体定向注射 | 第64页 |
2.3 注射区的显示-CTB/BDA 和 NeuN 的免疫荧光双重标记 | 第64-65页 |
2.4 标记终末内 CTB/BDA、VGLUTs 和 NeuN 的免疫荧光三重标记 | 第65-66页 |
2.5 标记终末内 CTB、VGLUT1 以及 VGLUT2 的免疫荧光三重标记 | 第66页 |
2.6 标记终末内 CTB/BDA 与 VGLUTs 的免疫电镜双重标记 | 第66-67页 |
2.7 利用 FG 的逆行束路追踪以及注射区的显示 | 第67页 |
2.8 逆标神经元内 FG 的免疫荧光结合 VGLUT1 mRNA 或 VGLUT2 mRNA 的荧光原位分子杂交双重检测 | 第67-68页 |
3 结果 | 第68-76页 |
3.1 TSNC 各亚核内 VGLUT1 mRNA 与 VGLUT2 mRNA 的分布以及共存分析 | 第68-69页 |
3.2 三叉神经感觉主核向丘脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达 | 第69-70页 |
3.3 三叉神经脊束核各亚核向丘脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达 | 第70-71页 |
3.4 三叉神经脊束核尾侧亚核 Vc 向臂旁核的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达 | 第71页 |
3.5 三叉神经感觉复合体各亚核向小脑的投射纤维终末内 VGLUTs 的表达 | 第71-72页 |
3.6 TSNC 内向丘脑投射的神经元内 VGLUT1 mRNA 以及 VGLUT2 mRNA 的表达 | 第72-74页 |
3.7 TSNC 内向小脑投射的神经元内 VGLUT1 mRNA 以及 VGLUT2 mRNA 的表达 | 第74-75页 |
3.8 TSNC 传出投射神经终末内 VGLUT1 与 VGLUT2 表达类型的电镜分析· | 第75-76页 |
4 讨论 | 第76-79页 |
第三部分 下调延髓背角内 VGLUT2 对口面部痛信息传递的影响 | 第79-91页 |
1 材料 | 第79-80页 |
1.1 动物 | 第79页 |
1.2 质粒、限制性内切酶 | 第79页 |
1.3 细胞培养液及转染试剂 | 第79页 |
1.4 抗体 | 第79页 |
1.5 蛋白印记实验试剂 | 第79页 |
1.6 荧光原位分子杂交试剂 | 第79-80页 |
1.7 主要仪器 | 第80页 |
2 方法 | 第80-85页 |
2.1 携带报告基因的大鼠 VGLUT2 表达质粒的构建 | 第80页 |
2.2 针对 VGLUT2 的 siRNA 的设计和体外筛选 | 第80-81页 |
2.3 表达 VGLUT2shRNA 的慢病毒载体的包装 | 第81-82页 |
2.4 大鼠皮层神经元原代培养和慢病毒的感染 | 第82页 |
2.5 感染后神经元的免疫荧光染色 | 第82-83页 |
2.6 感染后神经元的 VGLUT2 表达量的 Western Blotting 检测 | 第83页 |
2.7 大鼠延髓背角内注射表达 VGLUT2 shRNA 及 VGLUT2 shcontrol 的慢病毒载体 | 第83页 |
2.8 大鼠痛行为变化的检测 | 第83-84页 |
2.9 利用 GFP 的加强免疫荧光染色结合 VGLUT2 mRNA 的荧光原位分子杂交检测注射慢病毒后大鼠延髓背角内 VGLUT2 mRNA 的表达下调 | 第84页 |
2.10 统计学处理 | 第84-85页 |
3 结果 | 第85-89页 |
3.1 体外成功筛选到高效下调 VGLUT2 的 siRNA 干扰序列 | 第85-86页 |
3.2 成功包装得到表达 VGLUT2 shRNA 的慢病毒载体,并对原代培养大鼠皮层神经元内 VGLUT2 的表达实现有效下调 | 第86-87页 |
3.3 将表达 VGLUT2 shRNA 的慢病毒注射入大鼠延髓背角,成功下调大鼠延髓背角内 VGLUT2 mRNA 的表达 | 第87-88页 |
3.4 延髓背角神经元感染慢病毒对大鼠口面部痛行为指标的影响 | 第88-89页 |
4 讨论 | 第89-91页 |
小结 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-104页 |
附录 | 第104-105页 |
个人简历和研究成果 | 第105-107页 |
致谢 | 第107页 |