| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第12-31页 |
| 1.1 海带研究概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 生物学特性 | 第12-15页 |
| 1.1.2 海带的应用价值 | 第15-16页 |
| 1.2 基因表达量测定的主要方法 | 第16-17页 |
| 1.3 实时荧光定量 PCR 技术概述 | 第17-21页 |
| 1.3.1 实时荧光定量 PCR 简介 | 第17-18页 |
| 1.3.2 qPCR 的原理 | 第18-19页 |
| 1.3.3 qPCR 检测方法 | 第19-21页 |
| 1.3.4 qPCR 定量方法 | 第21页 |
| 1.4 内参基因概述 | 第21-26页 |
| 1.4.1 内参基因具备条件 | 第22页 |
| 1.4.2 内参基因的筛选方法 | 第22-23页 |
| 1.4.3 植物中 qPCR 内参基因筛选及海带中内参基因应用的研究进展 | 第23-26页 |
| 1.5 七个管家基因（actin，EF1α，GAPDH，α-tubulin，β-tubulin， UBA52，UBA80）简介 | 第26-30页 |
| 1.5.1 actin 基因 | 第26-27页 |
| 1.5.2 EF1α基因 | 第27-28页 |
| 1.5.3 GAPDH 基因 | 第28页 |
| 1.5.4 α-Tubulin，β-Tubulin 基因 | 第28-29页 |
| 1.5.5 UBA52、UBA80 基因 | 第29-30页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-40页 |
| 2.1 实验材料与主要试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.2 实验中的主要试剂及其配方 | 第31-33页 |
| 2.1.3 系统进化分析中所涉及的序列信息 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取及 cDNA 第一链的合成 | 第33-35页 |
| 2.2.1.1 配子体总 RNA 的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.1.2 孢子体总 RNA 的提取 | 第34页 |
| 2.2.1.3 cDNA 第一链的合成 | 第34-35页 |
| 2.2.2 内参基因的克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.2.1 海带内参候选基因的确定及克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.2.2 引物设计 | 第36页 |
| 2.2.2.3 PCR 反应 | 第36-37页 |
| 2.2.2.4 目标条带测序 | 第37页 |
| 2.2.2.5 测序结果分析 | 第37页 |
| 2.2.3 内参基因筛选 | 第37-39页 |
| 2.2.3.1 引物设计 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 普通 PCR 检测扩增产物 | 第38-39页 |
| 2.2.3.3 引物扩增效率的测定 | 第39页 |
| 2.2.3.4 荧光定量 PCR | 第39页 |
| 2.2.3.5 数据处理 | 第39页 |
| 2.2.4 部分管家基因的系统进化分析 | 第39-40页 |
| 3 结果及分析 | 第40-71页 |
| 3.1 内参基因克隆结果 | 第40-46页 |
| 3.1.1 RNA 提取结果 | 第40-41页 |
| 3.1.2 PCR 扩增结果 | 第41页 |
| 3.1.3 克隆结果的分析 | 第41-46页 |
| 3.2 部分内参基因的系统发育分析结果 | 第46-51页 |
| 3.2.1 Actin 的系统进化分析 | 第46-47页 |
| 3.2.2 EF1α的系统进化分析 | 第47-48页 |
| 3.2.3 GAPDH 基因的系统进化分析 | 第48-49页 |
| 3.2.4 α-Tubulin，β-Tubulin 的系统进化分析 | 第49-51页 |
| 3.3 海带不同组织部位内参基因筛选的结果 | 第51-60页 |
| 3.3.1 RNA 的提取 | 第51-52页 |
| 3.3.2 引物特异性分析 | 第52-54页 |
| 3.3.3 引物扩增效率的检测 | 第54-55页 |
| 3.3.4 不同组织部位内参基因稳定性分析 | 第55-60页 |
| 3.3.5 海带不同组织部位内参筛选小结 | 第60页 |
| 3.4 海带不同生长时期内参基因的筛选 | 第60-68页 |
| 3.4.1 RNA 的提取 | 第60-61页 |
| 3.4.2 引物特异性分析 | 第61-63页 |
| 3.4.3 不同时期内参基因稳定性分析 | 第63-67页 |
| 3.4.4 海带不同生长时期内参筛选小结 | 第67-68页 |
| 3.5 海带不同组织部位和不同生长时期内参基因总评 | 第68-70页 |
| 3.6 关于在海带不同时期内参基因筛选中用 18S 校正其他内参基因表达量的研究 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 海带总 RNA 提取方法的改进 | 第71页 |
| 4.2 cDNA 第一链反转录体系的优化 | 第71-72页 |
| 4.3 内参基因的克隆及系统进化分析 | 第72-73页 |
| 4.4 海带内参基因的筛选 | 第73-75页 |
| 4.5 基因多拷贝现象对内参基因表达量的影响 | 第75页 |
| 5 小结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 附录 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 个人简历 | 第92-93页 |
