| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 海藻及海带概述 | 第12-16页 |
| 1.1 海藻概述 | 第12-13页 |
| 1.2 海带研究概述 | 第13-16页 |
| 2 褐藻多糖研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1 褐藻胶的生物合成、功能及应用 | 第16-18页 |
| 2.2 岩藻多糖及功能 | 第18-19页 |
| 3 磷酸甘露糖异构酶（PMI）研究概况 | 第19-23页 |
| 3.1 PMI蛋白的功能 | 第19-20页 |
| 3.2 PMI基因的分布及分类 | 第20-22页 |
| 3.3 PMI蛋白三维结构研究进展 | 第22-23页 |
| 4 巴斯德酵母表达系统的研究进展 | 第23-26页 |
| 4.1 巴斯德酵母表达系统的优势 | 第23页 |
| 4.2 巴斯德毕赤酵母常用的表达菌株 | 第23-24页 |
| 4.3 巴斯德毕赤酵母常见的表达载体 | 第24-26页 |
| 第二章 海带PMI基因的克隆及分子系统发生学分析 | 第26-57页 |
| 1 实验材料 | 第26-27页 |
| 1.1 海带样品 | 第26页 |
| 1.2 试剂、试剂盒及主要仪器 | 第26页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.1 海带配子体和孢子体总DNA的提取及检测 | 第27-28页 |
| 2.2 海带配子体RNA的提取及总RNA反转录 | 第28-29页 |
| 2.3 海带基因组数据库和转录组数据库搜索 | 第29-30页 |
| 2.4 海带PMI基因DNA扩增 | 第30-33页 |
| 2.5 PMI1 和PMI4 基因CDS序列的扩增 | 第33-36页 |
| 2.6 目的片段回收和克隆 | 第36页 |
| 2.7 对已获得的CDS序列进行生物信息学分析 | 第36-37页 |
| 2.8 PMI分子系统发生学分析 | 第37页 |
| 3 实验结果及分析 | 第37-53页 |
| 3.1 DNA和RNA提取结果 | 第37-38页 |
| 3.2 海带 3 个PMI基因的DNA序列扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.3 海带PMI1 和PMI4 基因CDS序列扩增结果 | 第39-44页 |
| 3.4 PMI基因转录组数据库搜索结果 | 第44-45页 |
| 3.5 PMI1、PMI2 和PMI4 的生物信息学分析 | 第45-49页 |
| 3.6 PMI基因编码蛋白的同源性分析结果 | 第49-52页 |
| 3.7 PMI基因的系统发生学分析结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 海带PMI基因与长囊水云PMI基因的比较 | 第53-54页 |
| 4.2 褐藻PMI基因拷贝数和转录丰度的探讨 | 第54-55页 |
| 4.3 褐藻PMI基因同源性分析 | 第55页 |
| 4.4 褐藻PMI基因系统进化 | 第55-57页 |
| 第三章 海带PMI4 基因的原核表达 | 第57-67页 |
| 1 实验材料 | 第57-58页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第57-58页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第58页 |
| 2 实验步骤 | 第58-63页 |
| 2.1 原核表达载体pET32a-PMI4 的构建 | 第58-60页 |
| 2.2 重组质粒pET32a-PMI4 转化至BL21 表达菌株 | 第60页 |
| 2.3 His-PMI4 融合蛋白诱导表达 | 第60-61页 |
| 2.4 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第61页 |
| 2.5 重组蛋白His-PMI4 的纯化及透析 | 第61-63页 |
| 3 实验结果及讨论 | 第63-67页 |
| 3.1 pET32a-PMI4 表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 3.2 pET32a-PMI4 表达载体转化至大肠杆菌表达菌株BL21 | 第64页 |
| 3.3 His-PMI4 融合蛋白诱导表达 | 第64-67页 |
| 第四章 海带PMI4 在巴斯德毕赤酵母中的表达及酶学性质研究 | 第67-82页 |
| 1 实验材料 | 第67-69页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第67页 |
| 1.2 试剂、试剂盒及主要仪器 | 第67页 |
| 1.3 主要培养基及试剂配制 | 第67-69页 |
| 2 试验步骤 | 第69-74页 |
| 2.1 pPICZαA-PMI4 表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 2.2 巴斯德毕赤酵母X-33 感受态细胞的制备 | 第70-71页 |
| 2.3 巴斯德毕赤酵母X-33 的电击转化 | 第71页 |
| 2.4 转化巴斯德毕赤酵母X-33 PCR检测重组子的方法 | 第71-72页 |
| 2.5 pPICZαA-PMI4 在巴斯德毕赤酵母X-33 中诱导表达 | 第72-73页 |
| 2.6 Ni柱纯化 | 第73页 |
| 2.7 SDS-PAGE、Western-Blot检测 | 第73-74页 |
| 2.8 重组蛋白His-PMI4 酶活性质研究 | 第74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-81页 |
| 3.1 pPICZαA-PMI4 表达载体的构建 | 第74-76页 |
| 3.2 pPICZαA-PMI4 电转化至巴斯德毕赤酵母X-33 | 第76页 |
| 3.3 PMI4 基因在巴斯德毕赤酵母X-33 诱导表达 | 第76-77页 |
| 3.4 Western-Blot检测结果 | 第77-78页 |
| 3.5 酶学性质研究 | 第78-81页 |
| 4 讨论 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 附录 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 个人简历 | 第94页 |
| 发表的学术论文 | 第94-95页 |
