| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第11-13页 |
| 2 试验材料 | 第13-15页 |
| 2.1 主要仪器设备 | 第13页 |
| 2.2 试验试剂 | 第13页 |
| 2.3 植物材料及试验菌株 | 第13-14页 |
| 2.4 培养基 | 第14-15页 |
| 3 试验方法 | 第15-28页 |
| 3.1 植物材料的培养及取样 | 第15页 |
| 3.2 酵母双杂交阳性克隆一对一回复验证 | 第15-16页 |
| 3.2.1 酵母质粒的提取 | 第15页 |
| 3.2.2 酵母感受态细胞的制备 | 第15-16页 |
| 3.2.3 酵母质粒的共转化 | 第16页 |
| 3.2.4 共转化酵母的稀释涂布 | 第16页 |
| 3.3 RACE 技术扩增 cDNA 全长 | 第16-20页 |
| 3.3.1 总 RNA 的提取、纯化及检测 | 第16-17页 |
| 3.3.2 5’-RACE-Ready cDNA 的合成 | 第17-18页 |
| 3.3.3 5’-RACE PCR | 第18-20页 |
| 3.4 基因 cDNA 全长的获得及生物信息学分析 | 第20页 |
| 3.5 双分子荧光互补验证目的基因与 CaM 的体内相互作用 | 第20-21页 |
| 3.6 电泳迁移率变动分析（EMSA） | 第21-22页 |
| 3.6.1 多肽段的合成 | 第21页 |
| 3.6.2 TaCaM4-1 原核表达蛋白的诱导及分离纯化 | 第21页 |
| 3.6.3 多肽段的电泳迁移率变动分析 | 第21-22页 |
| 3.7 TaCAMTA4 基因 DNA 结合区基因片段的原核表达 | 第22-26页 |
| 3.7.1 总 RNA 的提取 | 第22页 |
| 3.7.2 总 RNA 的纯化 | 第22页 |
| 3.7.3 总 RNA 含量、纯度及完整性检测 | 第22页 |
| 3.7.4 cDNA 第一条链的合成 | 第22-23页 |
| 3.7.5 引物设计与合成 | 第23页 |
| 3.7.6 原核表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 3.7.7 原核表达的诱导及检测 | 第25-26页 |
| 3.8 实时定量 PCR（qRT-PCR）检测基因表达水平 | 第26-28页 |
| 3.8.1 总 RNA 的提取 | 第26页 |
| 3.8.2 总 RNA 的纯化 | 第26页 |
| 3.8.3 总 RNA 含量、纯度及完整性检测 | 第26-27页 |
| 3.8.4 cDNA 第一条链的合成 | 第27页 |
| 3.8.5 引物设计与合成 | 第27页 |
| 3.8.6 qRT-PCR 反应 | 第27-28页 |
| 4 试验结果与分析 | 第28-38页 |
| 4.1 酵母双杂交阳性克隆的一对一回复验证 | 第28-29页 |
| 4.2 目的基因 cDNA 全长的获得 | 第29-31页 |
| 4.2.1 目的基因选取 | 第29页 |
| 4.2.2 总 RNA 的完整性、含量及纯度检测 | 第29-30页 |
| 4.2.3 5’-RACE PCR 扩增 408 号基因 cDNA 末端及 cDNA 全长的获得 | 第30-31页 |
| 4.3 TaCAMTA4 基因的命名及生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 4.4 双分子荧光互补验证 TaCAMTA4 与 TaCaM4-1 在烟草细胞中的相互作用 | 第33-34页 |
| 4.5 电泳迁移率变动分析（EMSA）验证 TaCAMTA4 的 CaM 结合位点 | 第34-35页 |
| 4.6 TaCAMTA4 基因 DNA 结合区序列的原核表达 | 第35-37页 |
| 4.6.1 TaCAMTA 基因 DNA 结合区的原核表达载体的构建 | 第36页 |
| 4.6.2 TaCAMTA4 基因 DNA 结合区的原核表达 | 第36-37页 |
| 4.7 TaCAMTA4 在小麦受叶锈菌侵染过程中的表达分析 | 第37-38页 |
| 5 讨论 | 第38-43页 |
| 5.1 蛋白质互作研究方法的应用及意义 | 第38-39页 |
| 5.1.1 酵母双杂交技术 | 第38-39页 |
| 5.1.2 双分子荧光互补技术 | 第39页 |
| 5.1.3 电泳迁移率变动分析（EMSA） | 第39页 |
| 5.2 植物抗逆相关转录因子的研究意义 | 第39-41页 |
| 5.2.1 植物抗逆相关转录因子在植物抗逆中的作用 | 第39-40页 |
| 5.2.2 CAMTA 基因家族的研究意义 | 第40-41页 |
| 5.3 大片段、高 GC 含量基因扩增的思考 | 第41-42页 |
| 5.4 试验展望 | 第42-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第47-48页 |
| 作者简历 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
