| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| 1.1 毛色遗传研究现状 | 第10页 |
| 1.2 Agouti 基因研究现状 | 第10-14页 |
| 1.2.1 Agouti 基因作用机理 | 第10-11页 |
| 1.2.2 Agouti 基因研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2.3 山羊 Agouti 基因研究现状 | 第13页 |
| 1.2.4 本课题组对山羊 Agouti 基因研究成果 | 第13-14页 |
| 1.3 启动子的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.3.1 真核生物的启动子 | 第14页 |
| 1.3.2 启动子的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究的目的意义及主要内容 | 第15-17页 |
| 1.4.1 研究的目的和意义 | 第15页 |
| 1.4.2 研究的主要内容 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1 材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、载体和细胞 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 | 第18-20页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.4 主要分子生物学软件 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 山羊 DNA 的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 转录因子结合位点分析和引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.3 PCR 扩增 | 第22页 |
| 2.2.4 PCR 产物切胶回收 | 第22-23页 |
| 2.2.5 PCR 产物纯化 | 第23页 |
| 2.2.6 PCR 回收产物与 PMD19-T 载体连接 | 第23页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第23页 |
| 2.2.8 连接产物的转化 | 第23页 |
| 2.2.9 重组质粒的快速筛选 | 第23-24页 |
| 2.2.10 质粒的小量提取及酶切鉴定 | 第24页 |
| 2.2.11 报告基因载体的构建 | 第24页 |
| 2.2.12 质粒的无内毒素大量提取和浓度测定 | 第24-25页 |
| 2.2.13 细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.14 细胞的转染实验 | 第25-26页 |
| 2.2.15 报告基因的活性分析 | 第26页 |
| 2.2.16 数据处理 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-44页 |
| 3.1 基因组 DNA 的提取结果 | 第28页 |
| 3.2 山羊 Agouti 基因启动子预测区域的获得 | 第28-29页 |
| 3.3 重组质粒 pMD19-T/2537 的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3.1 PCR 鉴定 | 第29页 |
| 3.3.2 酶切鉴定 | 第29页 |
| 3.3.3 测序鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 启动子预测区转录因子结合位点分析 | 第30-31页 |
| 3.5 从重组质粒 PMD19-T/2537 中获得截短片段 | 第31页 |
| 3.6 重组质粒 pGL3-Basic/px 的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.6.1 PCR 鉴定 | 第31页 |
| 3.6.2 酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 3.6.3 测序鉴定 | 第32页 |
| 3.7 细胞培养 | 第32-33页 |
| 3.8 细胞转染及检测结果 | 第33-44页 |
| 3.8.1 最佳转染效率的确定 | 第33-34页 |
| 3.8.2 细胞转染检测结果及数据分析 | 第34-44页 |
| 4 讨论 | 第44-48页 |
| 4.1 实验过程讨论 | 第44-47页 |
| 4.1.1 PCR 扩增条件掌控 | 第44页 |
| 4.1.2 转录因子结合位点分析 | 第44页 |
| 4.1.3 重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 4.1.4 影响转染实验的因素 | 第45-46页 |
| 4.1.5 细胞转染的最佳体系 | 第46-47页 |
| 4.2 实验结果讨论 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
