| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-49页 |
| 1.1 生殖细胞发生 | 第17-31页 |
| 1.1.1 PGC的形成和迁移 | 第17-19页 |
| 1.1.2 配子发生 | 第19-31页 |
| 1.2 参与生殖细胞发生的相关基因 | 第31-41页 |
| 1.2.1 DEAD-box RNA解旋酶 | 第31-39页 |
| 1.2.2 FOX家族基因的研究进展 | 第39-40页 |
| 1.2.3 核受体基因研究进展 | 第40-41页 |
| 1.3 VTG的合成 | 第41-46页 |
| 1.3.1 VTG的生物学功能 | 第42-44页 |
| 1.3.2 VTG合成机制研究进展 | 第44-46页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第46-48页 |
| 1.5 技术路线 | 第48-49页 |
| 第二章 中华绒螯蟹DDX6基因的克隆及配子发生过程中表达分析 | 第49-80页 |
| 2.1 引言 | 第49-50页 |
| 2.2 材料与方法 | 第50-66页 |
| 2.2.1 实验样品的采集 | 第50页 |
| 2.2.2 主要实验试剂 | 第50-51页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 2.2.4 实验试剂的配制 | 第52-53页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第53-66页 |
| 2.3 实验结果 | 第66-78页 |
| 2.3.1 提取中华绒螯蟹各个组织RNA的质量 | 第66-67页 |
| 2.3.2 中华绒螯蟹中Es-DDX6 cDNA序列分析 | 第67页 |
| 2.3.3 中华绒螯蟹中Es-DDX6同源比对及进化树分析 | 第67-71页 |
| 2.3.4 Es-DDX6 mRNA在中华绒鳌蟹不同组织和性腺发育不同时期的表达分析 | 第71-74页 |
| 2.3.5 中华绒螯蟹性腺组织中Es-DDX6蛋白表达分析 | 第74页 |
| 2.3.6 Es-DDX6蛋白在中华绒螯蟹生殖系统中的亚细胞定位 | 第74-78页 |
| 2.4 讨论 | 第78-80页 |
| 第三章 中华绒螯蟹DDX52基因的克隆和表达模式研究 | 第80-110页 |
| 3.1 引言 | 第80-81页 |
| 3.2 材料与方法 | 第81-91页 |
| 3.2.1 实验样品的收集 | 第81页 |
| 3.2.2 中华绒螯蟹中DDX52基因组序列的验证 | 第81-83页 |
| 3.2.3 DDX52 cDNA全长序列的克隆 | 第83页 |
| 3.2.4 DDX52基因生物信息学分析 | 第83-84页 |
| 3.2.5 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第84页 |
| 3.2.6 原位杂交 | 第84-90页 |
| 3.2.7 Western blot | 第90页 |
| 3.2.8 免疫荧光 | 第90-91页 |
| 3.3 实验结果 | 第91-108页 |
| 3.3.1 提取中华绒螯蟹基因组 | 第91页 |
| 3.3.2 DDX52基因组结构分析 | 第91-92页 |
| 3.3.3 中华绒螯蟹中DDX52基因组序列验证结果 | 第92页 |
| 3.3.4 中华绒螯蟹中DDX52 cDNA序列分析 | 第92-99页 |
| 3.3.5 中华绒螯蟹中DDX52蛋白三级结构预测分析 | 第99页 |
| 3.3.6 Es-DDX52 mRNA的表达与定位 | 第99-104页 |
| 3.3.7 Es-DDX52蛋白的表达与定位 | 第104-108页 |
| 3.4 讨论 | 第108-110页 |
| 第四章 中华绒螯蟹FOXL2对VTG表达的调控 | 第110-139页 |
| 4.1 引言 | 第110-111页 |
| 4.2 材料与方法 | 第111-116页 |
| 4.2.1 试剂与仪器 | 第111页 |
| 4.2.2 实验样品的采集 | 第111-112页 |
| 4.2.3 RNA提取 | 第112-113页 |
| 4.2.4 FOXL2、FTZ-F1和DDX20全长序列的克隆 | 第113页 |
| 4.2.5 生物信息学分析 | 第113页 |
| 4.2.6 目的基因mRNA水平表达分析 | 第113-114页 |
| 4.2.7 pET-32a-EsFH载体的构建及表达 | 第114-115页 |
| 4.2.8 Western blot | 第115页 |
| 4.2.9 免疫荧光 | 第115-116页 |
| 4.2.10 免疫共沉淀 | 第116页 |
| 4.3 实验结果 | 第116-136页 |
| 4.3.1 中华绒螯蟹中FOXL2、FTZ-F1和DDX20 cDNA序列分析 | 第116-120页 |
| 4.3.2 中华绒螯蟹中FOXL2和FTZ-F1同源比对及进化树分析 | 第120-122页 |
| 4.3.3 中华绒螯蟹中FOXL2、FTZ-F1、DDX20和VTG mRNA表达模式分析 | 第122-123页 |
| 4.3.4 中华绒螯蟹中FOXL2、FTZ-F1、DDX20和VTG蛋白表达分析 | 第123-126页 |
| 4.3.5 中华绒螯蟹中FOXL2、DDX20、FTZ-F1和VTG蛋白亚细胞定位 | 第126-129页 |
| 4.3.6 中华绒螯蟹成熟期FOXL2与DDX20调控滤泡细胞凋亡 | 第129页 |
| 4.3.7 中华绒螯蟹成熟期FOXL2与FTZ-F1负调控VTG合成 | 第129-133页 |
| 4.3.8 中华绒螯蟹中FOXL2与DDX20、FTZ-F1蛋白间相互作用分析 | 第133-136页 |
| 4.4 讨论 | 第136-139页 |
| 第五章 总结与展望 | 第139-142页 |
| 5.1 主要结论 | 第139-140页 |
| 5.2 创新点 | 第140-141页 |
| 5.3 展望 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-172页 |
| 附录 | 第172-174页 |
| 致谢 | 第174-175页 |
