| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 1.1 真核生物转录 | 第12-17页 |
| 1.1.1 转录起始 | 第12-13页 |
| 1.1.2 转录延伸 | 第13页 |
| 1.1.3 转录终止 | 第13-14页 |
| 1.1.4 Pol Ⅱ的CTD翻译后修饰动态变化在转录中的作用 | 第14-17页 |
| 1.2 真核生物3’-UTR在基因表达中的作用 | 第17-21页 |
| 1.2.1 3'-UTR的结构和组成 | 第17-18页 |
| 1.2.2 3'-UTR的调控作用 | 第18-20页 |
| 1.2.3 缺少3'-UTR对基因表达的影响 | 第20-21页 |
| 1.3 基因表达的表观遗传调控 | 第21-26页 |
| 1.3.1 DNA甲基化 | 第21-23页 |
| 1.3.2 组蛋白修饰及染色质的重塑 | 第23-24页 |
| 1.3.3 非编码RNAs | 第24-25页 |
| 1.3.4 RNA聚合酶Pol Ⅳ和Pol Ⅴ | 第25-26页 |
| 1.4 SUMO修饰的研究进展 | 第26-32页 |
| 1.4.1 SUMO分子 | 第26-27页 |
| 1.4.2 SUMO连接系统 | 第27-30页 |
| 1.4.3 SUMO修饰的调控作用及生物学功能 | 第30-32页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第34-55页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第34-36页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第34页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.3 常用试剂和药品 | 第34-35页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 常用培养基及溶液的配置 | 第36-38页 |
| 2.2.1 常用培养基的配制 | 第36页 |
| 2.2.2 常用试剂的配制 | 第36-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-52页 |
| 2.3.1 植物培养条件 | 第38-39页 |
| 2.3.2 质粒构建 | 第39-41页 |
| 2.3.3 农杆菌介导的转基因植株的获得 | 第41-42页 |
| 2.3.4 SDS法提取基因组DNA | 第42页 |
| 2.3.5 CTAB法提取基因组DNA | 第42页 |
| 2.3.6 QIAGEN试剂盒(DNasy plant mini kit)提取植物基因组DNA | 第42-43页 |
| 2.3.7 RT-PCR和实时荧光定量PCR | 第43-45页 |
| 2.3.8 Northern blot | 第45-47页 |
| 2.3.9 试剂盒方法提取纯化大量质粒(威格拉斯) | 第47页 |
| 2.3.10 氯化铯梯度离心法纯化质粒 | 第47-48页 |
| 2.3.11 原生质体转化 | 第48-49页 |
| 2.3.12 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第49-50页 |
| 2.3.13 免疫共沉淀实验(Co-IP) | 第50页 |
| 2.3.14 杂交 | 第50页 |
| 2.3.15 突变体的筛选,图位克隆和回补实验 | 第50-51页 |
| 2.3.16 农杆菌瞬时转化烟草 | 第51页 |
| 2.3.17 Luciferase(LUC)双分子荧光互补实验(split-LUC) | 第51-52页 |
| 2.4 引物 | 第52-55页 |
| 2.4.1 载体构建引物 | 第52-53页 |
| 2.4.2 Northern blot,RT-PCR和Realtime-PCR引物 | 第53-55页 |
| 第三章 结果与分析 | 第55-80页 |
| 3.1 突变体438-1的筛选与表型分析 | 第55-59页 |
| 3.1.1 突变体438-1的获得 | 第55-56页 |
| 3.1.2 438-1中LUC利用下游HPT基因的3'-UTR发生了转录通读 | 第56-58页 |
| 3.1.3 内源转座子MULE-F19G14在438-1中利用下游基因的3'-UTR也发生了转录通读 | 第58-59页 |
| 3.2 突变体438-1突变基因的克隆 | 第59-62页 |
| 3.2.1 OTS1基因的克隆 | 第59-62页 |
| 3.2.2 ots1-3突变体的互补 | 第62页 |
| 3.3 OTS1在限制转录通读方面的功能分析 | 第62-65页 |
| 3.3.1 OTS1去SUMO修饰的蛋白酶活性对于限制转录通读是必需的 | 第62-63页 |
| 3.3.2 OTS1和OTS2在限制转录通读方面没有功能冗余 | 第63-65页 |
| 3.4 OTS1与MOM1可能在不同的途径对转录通读进行调控 | 第65-67页 |
| 3.5 OTS1介导的异常基因的TGS与已知RdDM和DNA甲基化维持途径的关系 | 第67-72页 |
| 3.5.1 甲基转移酶MET1和CMT3也能限制异常基因的转录通读且独立于OTS1 | 第68-70页 |
| 3.5.2 突变体ots1-3中的转录通读需要RNA聚合酶Pol Ⅴ和DDR复合物 | 第70页 |
| 3.5.3 突变体ots1-3中的转录通读并不需要RNA聚合酶Pol Ⅳ | 第70-72页 |
| 3.6 OTS1介导异常基因TGS相关底物的探寻 | 第72-76页 |
| 3.6.1 OTS1与NRPE1在体内相互作用 | 第72-73页 |
| 3.6.2 NRPE1在体内能被SUMO1修饰 | 第73-75页 |
| 3.6.3 OTS1的突变不影响NRPE1的稳定性和转录活性 | 第75-76页 |
| 3.7 SUMO修饰在异常基因的转录沉默方面起着关键的调控作用 | 第76-80页 |
| 3.7.1 许多SUMO蛋白酶都参与了异常基因的转录沉默过程 | 第76-77页 |
| 3.7.2 SUMO连接过程也正调控异常基因的TGS | 第77-80页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第80-84页 |
| 4.1 分析与讨论 | 第80-83页 |
| 4.1.1 OTS1的突变导致缺少3’-UTR的基因发生转录通读 | 第81页 |
| 4.1.2 OTS1介导缺少3’-UTR基因的沉默不依赖于MOM1 | 第81-82页 |
| 4.1.3 OTS2不参与OTS1介导的缺少3'-UTR基因的沉默过程 | 第82页 |
| 4.1.4 RNA聚合酶Pol Ⅴ和DDR复合物的突变抑制ots1突变体中的转录通读 | 第82-83页 |
| 4.1.5 SUMO修饰在缺少3’-UTR基因的沉默机制中起着关键的作用 | 第83页 |
| 4.2 小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 个人简历 | 第98页 |
