| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1 富脯氨酸蛋白PRP及EARLI1基因研究进展 | 第12-15页 |
| ·富脯氨酸蛋白PRP | 第12页 |
| ·HyPRP | 第12-13页 |
| ·EARLI1亚家族进化分析 | 第13-14页 |
| ·EARLI1基因研究进展 | 第14-15页 |
| 2 基因功能研究方法 | 第15-16页 |
| ·过表达基因 | 第16页 |
| ·T-DNA插入 | 第16页 |
| 3 植物对生物和非生物胁迫的应答机制 | 第16-19页 |
| ·植物的非生物胁迫应答机制 | 第17-18页 |
| ·植物对生物胁迫的应答机制 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19页 |
| 5 研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 EARLI1过表达及T-DNA敲除纯合体的筛选 | 第21-34页 |
| 1 材料和方法 | 第21-30页 |
| ·EARLI1过表达株系和T-DNA敲除突变体的产生 | 第21-22页 |
| ·采用Kan抗性标记筛选过表达纯合体 | 第22页 |
| ·采用三引物PCR法筛选T-DNA敲除突变体 | 第22-24页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·植物基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增体系 | 第23-24页 |
| ·EARLI1过表达及敲除突变体的半定量RT-PCR验证 | 第24-27页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳快速检测总RNA的质量 | 第26页 |
| ·PCR扩增引物的设计 | 第26页 |
| ·PCR反应体系 | 第26-27页 |
| ·Norhtern blot分析 | 第27-30页 |
| ·植物总RNA提取 | 第27页 |
| ·杂交探针的制备 | 第27-28页 |
| ·RNA甲醛凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·变性RNA向尼龙膜的毛细管转移 | 第29-30页 |
| ·杂交 | 第30页 |
| ·杂交信号的检测 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-33页 |
| ·利用抗性标记筛选过表达纯合体 | 第30-31页 |
| ·敲除突变纯合个体的筛选 | 第31-32页 |
| ·过表达及T-DNA敲除突变纯合体EARLI1的表达分析 | 第32页 |
| ·过表达及敲除突变体EARLI1基因的Northern印迹分析 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 EARLI1在非生物胁迫中的抗性功能 | 第34-49页 |
| 1 材料和方法 | 第34-36页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·EARLI1抗盐性分析 | 第34-36页 |
| ·表型分析 | 第34页 |
| ·种子萌发率分析 | 第34页 |
| ·根伸长量的测定 | 第34页 |
| ·叶片鲜重测定 | 第34-35页 |
| ·脯氨酸含量测定 | 第35页 |
| ·钠元素测定 | 第35页 |
| ·基因表达 | 第35-36页 |
| ·EARLI1对耐旱性的影响 | 第36页 |
| ·根伸长量和叶片相对含水量的测定 | 第36页 |
| ·EARLI1对植物激素ABA的反应 | 第36页 |
| ·种子萌发率分析 | 第36页 |
| 2 结果 | 第36-46页 |
| ·三种实验材料在盐胁迫下的表型和生理研究 | 第36-41页 |
| ·表型分析 | 第36-37页 |
| ·种子萌发率统计 | 第37-38页 |
| ·植株叶片鲜重测定 | 第38-39页 |
| ·根伸长量测定 | 第39-40页 |
| ·脯氨酸和钠离子含量测定 | 第40-41页 |
| ·盐胁迫下EARLI1基因的表达水平 | 第41-43页 |
| ·EARLI1表达的半定量RT-PCR分析 | 第42页 |
| ·EARLI1表达的Northern杂交分析 | 第42-43页 |
| ·AtNHX1基因表达的半定量RT-PCR分析 | 第43页 |
| ·EARLI1在干旱胁迫下的抗性功能 | 第43-44页 |
| ·根相对伸长量和叶片相对含水量的测定 | 第43-44页 |
| ·EARLI1对ABA的应答特征 | 第44-46页 |
| ·种子萌发率分析 | 第44-46页 |
| ·不同ABA浓度下幼苗的生长情况 | 第46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 EARLI1在生物胁迫下的抗性功能 | 第49-61页 |
| 1 材料和方法 | 第49-54页 |
| ·拟南芥EARLI1基因真菌抗性功能分析 | 第49-50页 |
| ·植物材料和方法 | 第49页 |
| ·真菌的接种 | 第49页 |
| ·真菌侵染结果鉴定 | 第49-50页 |
| ·Northern印迹杂交分析 | 第50页 |
| ·EARLI1基因对酿酒酵母生长的影响 | 第50-54页 |
| ·酵母菌、表达载体及培养条件 | 第50-51页 |
| ·转基因酵母的菌落PCR检测 | 第51-52页 |
| ·转基因酵母的Western blot检测 | 第52-54页 |
| ·EARLI1对酵母生长的影响 | 第54页 |
| ·拟南芥EARLI1抗虫功能分析 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-60页 |
| ·真菌对拟南芥叶片的侵染情况 | 第54-55页 |
| ·台酚蓝染色 | 第55-56页 |
| ·蒜薹灰霉菌侵染对EARLI1表达的的影响 | 第56页 |
| ·转基因酵母的PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转基因酵母的Western印迹分析 | 第57-58页 |
| ·EARLI1基因表达后对酵母细胞生长的影响 | 第58-59页 |
| ·酵母在不同培养基上的生长曲线 | 第58页 |
| ·转EARLI1酵母经半乳糖诱导后的生长情况 | 第58-59页 |
| ·拟南芥EARLI1基因抗虫功能分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 第五章 EARLI1基因功能在烟草中的验证 | 第61-70页 |
| 1 材料和方法 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·pPZP211EARLI1载体的鉴定 | 第61-62页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第62页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第62-63页 |
| ·转基因植物PCR及RT-PCR检测 | 第63页 |
| ·Northern杂交检测 | 第63页 |
| ·生理生化指标测定 | 第63页 |
| ·盐胁迫下根伸长量的测定 | 第63页 |
| ·钠离子测定 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-69页 |
| ·pPZP211EARLI1载体的酶切鉴定 | 第63-64页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第64-65页 |
| ·转基因植物的PCR及RT-PCR检测 | 第65-67页 |
| ·NPTII基因PCR结果 | 第65页 |
| ·烟草EARLI1基因PCR结果 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR结果 | 第66-67页 |
| ·转基因植物的Northern杂交检测 | 第67-68页 |
| ·生理生化指标 | 第68-69页 |
| ·盐胁迫下根伸长量 | 第68页 |
| ·钠离子测定 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 1 研究结论 | 第70-71页 |
| ·EARLI1过表达及T-DNA敲除突变体纯合体的筛选 | 第70页 |
| ·EARLI1过表达及敲除突变体的基因表达分析 | 第70页 |
| ·EARLI1在生物胁迫及非生物胁迫下的表达变化 | 第70页 |
| ·EARLI1在生物胁迫及非生物胁迫下的生物学功能 | 第70-71页 |
| ·EARLI1基因功能在烟草中的验证 | 第71页 |
| 2 本研究的特色与创新 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
