| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 丙型肝炎病毒概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 丙型肝炎病毒的发现及流行病学 | 第10-11页 |
| 1.1.2 HCV的结构与功能 | 第11-13页 |
| 1.1.3 HCV新药物研发进展 | 第13-14页 |
| 1.2 HMGB1蛋白的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 HMGB1蛋白的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 HMGB1蛋白的功能 | 第15-16页 |
| 1.3 本课题的研究方案及目的 | 第16-18页 |
| 第2章 HMGB1对HCV的影响 | 第18-41页 |
| 2.1 前言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2.1 实验耗材与试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.2 主要实验仪器和设备 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-31页 |
| 2.3.1 特异性HMGB1-shRNA的制备 | 第19-22页 |
| 2.3.2 HMGB1过表达载体质粒的制备 | 第22-23页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.3.4 质粒转染及RNA转染 | 第24-25页 |
| 2.3.5 RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.6 逆转录PCR(Reverse Transcription PCR) | 第26-27页 |
| 2.3.7 荧光定量PCR(SYBR Green法) | 第27-28页 |
| 2.3.8 蛋白质的提取 | 第28页 |
| 2.3.9 蛋白质浓度的测定(Bio-Rad试剂盒) | 第28页 |
| 2.3.10 蛋白免疫印迹(Western Blot) | 第28-31页 |
| 2.3.11 细胞活力测定实验(MTS) | 第31页 |
| 2.3.12 统计学分析 | 第31页 |
| 2.4 实验结果 | 第31-40页 |
| 2.4.1 特异性HMGB1-shRNA沉默效果鉴定 | 第31-32页 |
| 2.4.2 特异性p3×FLAF-CMV-HMGB1过表达效果鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4.3 HMGB1对HCV的影响 | 第33-35页 |
| 2.4.4 HMGB1对HCV复制和翻译的影响 | 第35-37页 |
| 2.4.5 胞内外HMGB1对HCV起着不同的功能作用 | 第37-40页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第3章 HMGB1与HCV正链5'UTR茎环结构4相结合 | 第41-58页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.2.1 实验耗材与试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.2 主要实验仪器和设备 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第42页 |
| 3.3.2 免疫荧光(Immunofluorescence)实验步骤 | 第42-44页 |
| 3.3.3 激光共聚焦 | 第44-45页 |
| 3.3.4 免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| 3.3.5 Western Blot实验步骤 | 第46页 |
| 3.3.6 RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP) | 第46-48页 |
| 3.3.7 细胞培养 | 第48页 |
| 3.3.8 细胞转染 | 第48页 |
| 3.3.9 体外转录(Ambion试剂盒) | 第48-49页 |
| 3.3.10 统计学分析 | 第49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-56页 |
| 3.4.1 HMGB1蛋白与HCV正链RNA相结合 | 第49-52页 |
| 3.4.2 HCV 5’UTR为HMGB1的结合区域 | 第52-55页 |
| 3.4.3 HMGB1蛋白与HCV 5’UTR茎环结构4(SL4)相互作用 | 第55-56页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第4章 HMGB1 A box是HCV 5'UTR的结合区域及关键功能区域 | 第58-70页 |
| 4.1 前言 | 第58-59页 |
| 4.2 实验材料 | 第59页 |
| 4.2.1 实验耗材与试剂 | 第59页 |
| 4.2.2 主要实验仪器和设备 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-65页 |
| 4.3.1 HMGB1分段过表达质粒的构建 | 第59-64页 |
| 4.3.2 HMGB1分段过表达质粒的表达鉴定 | 第64页 |
| 4.3.3 细胞转染 | 第64页 |
| 4.3.4 RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP) | 第64页 |
| 4.3.5 免疫共沉淀 | 第64页 |
| 4.3.6 逆转录PCR | 第64页 |
| 4.3.7 荧光定量PCR(SYBR Green法) | 第64页 |
| 4.3.8 统计学分析 | 第64-65页 |
| 4.4 实验结果 | 第65-69页 |
| 4.4.1 重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| 4.4.2 HMGB1各分段与HCV 5’UTR RNA之间的作用 | 第66-68页 |
| 4.4.3 HMGB1蛋白各分段在促进病毒复制中的作用 | 第68-69页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
