| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 砷的化学组成和历史 | 第13-14页 |
| 1.3 砷在微生物体内的转化 | 第14页 |
| 1.4 砷的生态学 | 第14-15页 |
| 1.5 砷的应用 | 第15页 |
| 1.6 砷的毒性 | 第15-16页 |
| 1.7 微生物抗砷 | 第16-24页 |
| 1.7.1 氧化 | 第16页 |
| 1.7.2 砷吸收量的控制 | 第16页 |
| 1.7.3 砷的迸出 | 第16-17页 |
| 1.7.4 微生物常见的抗砷蛋白 | 第17-23页 |
| 1.7.5 其它抗砷基因 | 第23-24页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第24页 |
| 1.9 本研究的内容和技术路线 | 第24-26页 |
| 2 ACR3类膜蛋白ArsY与ArsA相互作用的初探 | 第26-37页 |
| 2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-30页 |
| 2.2.1 培养基及主要试剂的制备 | 第28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 大肠杆菌质粒的少量制备 | 第29页 |
| 2.2.4 DNA片断及质粒的纯化 | 第29页 |
| 2.2.5 DNA的酶切及连接 | 第29页 |
| 2.2.6 菌落PCR | 第29页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第29页 |
| 2.2.8 抗砷实验 | 第29-30页 |
| 2.2.9 DNA序列合成 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-34页 |
| 2.3.1 arsA基因敲除质粒的构建 | 第30-32页 |
| 2.3.2 CDB3 ars1抗砷操纵子中arsA基因的生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 2.3.3 arsA基因的缺失对AW3110菌株抗砷能力的影响 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-35页 |
| 2.4.1 基因功能验证的方法 | 第34-35页 |
| 2.4.2 arsA基因在细胞抗砷机制中的功能 | 第35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-37页 |
| 3 Bacillus sp. CDB3 arsD非调节基因的验证及arsT基因的功能分析 | 第37-53页 |
| 3.1 材料 | 第37-39页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第39页 |
| 3.2.2 DNA测序方法 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-50页 |
| 3.3.1 arsDA基因敲除质粒的构建 | 第39-42页 |
| 3.3.2 arsT基因敲除质粒的构建 | 第42-46页 |
| 3.3.3 ArsD的生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 3.3.4 CDB3 ArsD非调节蛋白的验证 | 第47-48页 |
| 3.3.5 ArsT的生物信息学分析 | 第48-49页 |
| 3.3.6 arsT基因的缺失对抗砷能力的影响 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 4 Bacillus sp. CDB3 ars1新基因orf7和orf8的功能分析 | 第53-67页 |
| 4.1 材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第53-54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第55页 |
| 4.2.2 RNA提取 | 第55页 |
| 4.2.3 RT-PCR | 第55页 |
| 4.2.4 PCR反应 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-65页 |
| 4.3.1 orf7,orf8和arsC基因敲除质粒的构建 | 第55-60页 |
| 4.3.2 RT-PCR对转pAR27大肠杆菌中8-gene转录子表达的验证 | 第60-61页 |
| 4.3.3 orf7和orf8突变株对大肠杆菌抗砷能力的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.4 orf8基因产物是否是抗砷还原酶的验证 | 第62-65页 |
| 4.3.5 orf8基因可提高异源菌株对砷的抗性 | 第65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 5 新抗砷基因的筛选及其功能分析 | 第67-75页 |
| 5.1 材料与方法 | 第67页 |
| 5.2 结果 | 第67-73页 |
| 5.2.1 抗砷操纵子中新抗砷基因的筛选及初步分析 | 第67-72页 |
| 5.2.2 抗砷操纵子中可能的抗砷基因的功能分类 | 第72-73页 |
| 5.3 讨论 | 第73-74页 |
| 5.4 本章小结 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 附录 | 第85-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
