| 致谢 | 第4-6页 |
| 附件 | 第6-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-24页 |
| 1.1 脂类代谢 | 第14-15页 |
| 1.2 影响鸡脂类代谢的因素 | 第15-19页 |
| 1.2.1 雌激素 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂肪因子 | 第16-19页 |
| 1.2.2.1 瘦素 | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 脂联素 | 第17页 |
| 1.2.2.3 抵抗素 | 第17页 |
| 1.2.2.4 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第17-18页 |
| 1.2.2.5 内脂素 | 第18页 |
| 1.2.2.6 肿瘤坏死因子 | 第18-19页 |
| 1.2.3 其他影响脂代谢的因素 | 第19页 |
| 1.3 Apelin与Apela | 第19-24页 |
| 1.3.1 Apelin | 第19-22页 |
| 1.3.1.1 Apelin与心血管机理 | 第21页 |
| 1.3.1.2 Apelin与脂代谢机理 | 第21-22页 |
| 1.3.2 Apela | 第22-24页 |
| 2 引言 | 第24-25页 |
| 3 鸡Apela基因的克隆及生物信息学分析 | 第25-41页 |
| 3.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 试验样品 | 第25页 |
| 3.1.2 试验试剂及部分所用试剂的配制方法 | 第25页 |
| 3.1.3 试验器材 | 第25-26页 |
| 3.2 试验方法 | 第26-32页 |
| 3.2.1 血清生化指标的检测 | 第26页 |
| 3.2.2 肝脏总RNA的提取及质量检测 | 第26-27页 |
| 3.2.2.1 肝脏总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.2.2.2 RNA质量检测 | 第27页 |
| 3.2.3 反转录 | 第27-28页 |
| 3.2.3.1 去除基因组DNA污染反应 | 第28页 |
| 3.2.3.2 反转录反应 | 第28页 |
| 3.2.4 cDNA的质量检测 | 第28-29页 |
| 3.2.4.1 反应体系 | 第28-29页 |
| 3.2.4.2 反应程序 | 第29页 |
| 3.2.5 引物设计、合成及质量检测 | 第29-30页 |
| 3.2.5.1 引物的设计及合成 | 第29页 |
| 3.2.5.2 引物的质量检测 | 第29-30页 |
| 3.2.5.3 引物信息 | 第30页 |
| 3.2.6 PCR产物的纯化回收 | 第30-31页 |
| 3.2.7 PCR产物的测序 | 第31页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR反应 | 第31页 |
| 3.2.8.1 反应体系 | 第31页 |
| 3.2.8.2 反应条件 | 第31页 |
| 3.2.9 标准曲线 | 第31-32页 |
| 3.2.10 实时荧光定量PCR数据分析 | 第32页 |
| 3.2.11 数据分析 | 第32页 |
| 3.2.12 生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-39页 |
| 3.3.1 青年鸡与产蛋高峰期鸡血清生化指标 | 第32-33页 |
| 3.3.2 RNA质量检测 | 第33页 |
| 3.3.3 cDNA质量检测 | 第33-34页 |
| 3.3.4 引物质量检测 | 第34-35页 |
| 3.3.5 实时荧光定量PCR标准曲线 | 第35-36页 |
| 3.3.6 转录组数据的验证 | 第36页 |
| 3.3.7 鸡Apela基因编码区序列扩增 | 第36-37页 |
| 3.3.7.1 鸡Apela基因扩增引物凝胶电泳图 | 第36-37页 |
| 3.3.7.2 鸡Apela基因编码区序列 | 第37页 |
| 3.3.8 鸡Apela生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.3.8.1 鸡Apela序列信息 | 第37页 |
| 3.3.8.2 同源性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.8.3 鸡Apela基因结构域预测 | 第38页 |
| 3.3.8.4 鸡Apela基因进化树构建 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 4 鸡Apela基因时空表达谱分析 | 第41-45页 |
| 4.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 试验动物及其样品的采集 | 第41页 |
| 4.1.2 试验试剂及其溶液配制 | 第41页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 试验方法 | 第42页 |
| 4.2.1 总RNA提取及质量检测 | 第42页 |
| 4.2.2 反转录及cDNA质量检测 | 第42页 |
| 4.2.3 cDNA混池的制备 | 第42页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR引物 | 第42页 |
| 4.2.5 实时荧光定量PCR反应 | 第42页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR数据分析 | 第42页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 4.3.1 cDNA质量检测 | 第42-43页 |
| 4.3.2 不同组织中鸡Apela基因的表达规律 | 第43页 |
| 4.3.3 鸡Apela基因在肝脏组织中的时空表达规律 | 第43-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44页 |
| 4.5 小结 | 第44-45页 |
| 5 鸡Apela基因表达调控研究 | 第45-54页 |
| 5.1 试验材料 | 第45-46页 |
| 5.1.1 试验动物 | 第45页 |
| 5.1.2 试验仪器 | 第45页 |
| 5.1.2.1 主要试验器材及耗材 | 第45页 |
| 5.1.2.2 试验仪器 | 第45页 |
| 5.1.3 试剂及溶液配制 | 第45-46页 |
| 5.2 试验方法 | 第46-48页 |
| 5.2.1 动物试验分组处理及血清制备 | 第46页 |
| 5.2.1.1 动物分组处理试验 | 第46页 |
| 5.2.1.2 动物血清的制备及血清生化指标的测定 | 第46页 |
| 5.2.2 细胞培养及处理 | 第46-47页 |
| 5.2.2.1 鸡胚胎肝脏原代细胞培养 | 第47页 |
| 5.2.3 总RNA提取 | 第47-48页 |
| 5.2.3.1 肝脏组织总RNA提取 | 第47-48页 |
| 5.2.3.2 细胞收集及总RNA提取 | 第48页 |
| 5.2.4 组织和细胞总RNA质量检测 | 第48页 |
| 5.2.5 反转录及cDNA质量检测 | 第48页 |
| 5.2.6 引物设计及质量检测 | 第48页 |
| 5.2.7 实时荧光定量PCR反应 | 第48页 |
| 5.2.8 数据处理 | 第48页 |
| 5.3 试验结果 | 第48-52页 |
| 5.3.1 雌激素处理后血清生化指标 | 第48-49页 |
| 5.3.2 鸡胚肝脏原代细胞形态观察 | 第49页 |
| 5.3.3 组织和细胞cDNA的质量检测 | 第49-50页 |
| 5.3.4 雌激素处理对鸡肝脏内APOB和APOVLDLII基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 5.3.5 雌激素处理对鸡肝脏中Apela基因表达的影响 | 第51页 |
| 5.3.6 雌激素处理鸡胚肝脏原代细胞后APOB和APOVLDLII基因表达变化 | 第51-52页 |
| 5.3.7 雌激素处理鸡胚肝脏原代细胞后Apela基因的表达变化 | 第52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 5.5 小结 | 第53-54页 |
| 6 雌激素调控鸡Apela基因表达的机制研究 | 第54-57页 |
| 6.1 试验材料 | 第54页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第54页 |
| 6.1.2 试验仪器 | 第54页 |
| 6.1.3 主要试剂及溶液配制 | 第54页 |
| 6.2 试验方法 | 第54-55页 |
| 6.2.1 鸡胚肝脏原代细胞的分离培养 | 第54页 |
| 6.2.2 雌激素受体拮抗剂对鸡胚肝脏原代细胞的处理 | 第54页 |
| 6.2.3 细胞总RNA的提取及质量检测 | 第54-55页 |
| 6.2.3.1 细胞RNA的提取 | 第55页 |
| 6.2.3.2 细胞RNA的质量检测 | 第55页 |
| 6.2.4 反转录及cDNA质量检测 | 第55页 |
| 6.2.5 引物设计 | 第55页 |
| 6.2.6 实时荧光定量PCR反应 | 第55页 |
| 6.2.7 数据处理 | 第55页 |
| 6.3 试验结果 | 第55页 |
| 6.3.1 雌激素受体拮抗剂对鸡Apela基因表达的影响 | 第55页 |
| 6.4 讨论 | 第55-56页 |
| 6.5 小结 | 第56-57页 |
| 7 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| ABSTRACT | 第67-68页 |
