| 提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第1章 Notch信号通路与糖尿病视网膜病变发病机制的相关研究 | 第17-53页 |
| 1.1 Notch信号途径 | 第17-33页 |
| 1.1.1 Notch受体的分子结构 | 第17-19页 |
| 1.1.2 Notch受体激活过程 | 第19-21页 |
| 1.1.3 CSL依赖的Notch信号通路 | 第21-23页 |
| 1.1.4 Notch信号通路的修饰调节 | 第23-26页 |
| 1.1.5 Notch信号通路的生理功能 | 第26-33页 |
| 1.2 Notch信号通路在视网膜发育不良和视网膜血管内环境稳定中的作用 | 第33-40页 |
| 1.2.1 视网膜发育 | 第33-35页 |
| 1.2.2 Notch信号行为的发育逻辑 | 第35-36页 |
| 1.2.3 Notch信号分子干扰的小鼠模型显示了神经视网膜发育的集中缺陷 | 第36-40页 |
| 1.3 糖尿病视网膜病变 | 第40-53页 |
| 1.3.1 糖尿病视网膜病变的病理 | 第40-42页 |
| 1.3.2 发病机制 | 第42-45页 |
| 1.3.3 PARP-1和NF-κB信号通路与糖尿病视网膜病变的关系 | 第45-49页 |
| 1.3.4 糖尿病视网膜病变中AKT通路的作用及与NF-κB通路的关系 | 第49-51页 |
| 1.3.5 Notch信号途径在糖尿病视网膜病变中的作用 | 第51页 |
| 1.3.6 Notch信号通路与其他信号通路的相互作用 | 第51-53页 |
| 第2章 糖尿病小鼠视网膜中Notch1、Dll4、PARP、Akt、NF-κB 和caspase-3表达的变化 | 第53-62页 |
| 前言 | 第53页 |
| 2.1 实验材料 | 第53-55页 |
| 2.1.1 主要仪器及设备 | 第53-54页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第55页 |
| 2.2 试验方法 | 第55-57页 |
| 2.2.1 糖尿病视网膜病变小鼠模型的建立 | 第55页 |
| 2.2.2 免疫组化法检测糖尿病小鼠视网膜中Notch1和NF-κB的表达 | 第55-56页 |
| 2.2.3 Western Blot法检测糖尿病小鼠视网膜中Notchl、Dll4、PARP-1、NF-κB、Atk 和caspase-3的表达 | 第56-57页 |
| 2.3 结果 | 第57-60页 |
| 2.3.1 免疫组化检测结果 | 第57-59页 |
| 2.3.2 Western Blot结果 | 第59-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第3章 Notch1信号通路通过对PARP和NF-κB相互作用的调控抑制视网膜血管内皮细胞凋亡 | 第62-81页 |
| 前言 | 第62页 |
| 3.1 实验材料 | 第62-65页 |
| 3.1.1 主要仪器及设备 | 第62-63页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第63-64页 |
| 3.1.3 细胞来源 | 第64-65页 |
| 3.2 实验方法 | 第65-71页 |
| 3.2.1 人视网膜血管内皮细胞和HEK293细胞的复苏、培养和传代 | 第65页 |
| 3.2.2 高糖培养人视网膜血管内皮细胞 | 第65页 |
| 3.2.3 Western Blot | 第65-66页 |
| 3.2.4 质粒构建(PARP-EGFP、Flag-NF-κB及Flag-Notchl质粒构建) | 第66-70页 |
| 3.2.5 免疫共沉淀 | 第70页 |
| 3.2.6 激光共聚焦扫描显微镜 | 第70-71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-78页 |
| 3.3.1 GFP-PARP质粒构建 | 第71-73页 |
| 3.3.2 FLAG-NF-κB质粒构建 | 第73-74页 |
| 3.3.3 FLAG-Notchl质粒构建 | 第74-75页 |
| 3.3.4 Western Blot检测不同浓度葡萄糖培养的HRVEC中Notch1、PARP、t-Akt、 NF 3.3.4W七setrnBlot检测不同浓度葡萄糖培养的HRVEC中Notehl、PARP、t-Akt、 3.3.4W七setrnBlot检测不同浓度葡萄糖培养的HRVEC中Notehl、PARP、t-Akt、NF-κB50和caspase-3表达量的变化 | 第75-76页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀法检测高糖情况下NF-κB与PARP-1相互作用 | 第76页 |
| 3.3.6 WesternBlot检测高糖下Notch1 拮抗PARP-1和NF-κB介导的细胞凋亡 | 第76-77页 |
| 3.3.7 激光共聚焦扫描显微镜 | 第77-78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-81页 |
| 第4章 SiNotchl及Akt抑制剂Wortmannin抑制Notchl对视网膜的保护作用 | 第81-93页 |
| 前言 | 第81页 |
| 4.1 实验材料 | 第81-83页 |
| 4.1.1 主要仪器及设备 | 第81-82页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第82-83页 |
| 4.1.3 细胞来源 | 第83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-85页 |
| 4.2.1 高糖环境下人视网膜血管内皮细胞的培养方法同第三章细胞培养 | 第83页 |
| 4.2.2 SiNotch1小干扰细胞转染 | 第83-84页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀及Western Blot方法及步骤同第3章方法 | 第84页 |
| 4.2.4 Annexin Ⅴ染色计数法检测细胞凋亡 | 第84-85页 |
| 4.3 实验结果 | 第85-90页 |
| 4.3.1 SiNotch1细胞转染结果 | 第85页 |
| 4.3.2 siNotch1敲除作用验证 | 第85-86页 |
| 4.3.3 免疫共沉淀检测siNotch1抑制Notch1的抗凋亡作用 | 第86页 |
| 4.3.4 Western Blot检测SiNotch1拮抗Dll4的作用 | 第86-87页 |
| 4.3.5 Western Blot检测wortmannin对Notch1信号的抑制作用 | 第87-88页 |
| 4.3.6 免疫共沉淀检测wortmannin对Notch1信号的抑制作用 | 第88-89页 |
| 4.3.7 Annexin-5法检测wortmannin对Notch1的抑制作用 | 第89-90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-93页 |
| 第5章 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-113页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第113-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
