| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 高等植物中有关GABA的研究 | 第10-16页 |
| 1.1.1 GABA在植物中的代谢途径 | 第10-11页 |
| 1.1.2 GABA在植物中的生理功能 | 第11-13页 |
| 1.1.3 GAD在植物中的相关研究 | 第13-16页 |
| 1.2 植物基因工程启动子研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.1 启动子的概念及结构特征 | 第16页 |
| 1.2.2 植物启动子的类型 | 第16-17页 |
| 1.2.3 植物启动子应用研究 | 第17页 |
| 1.3 GABA保健食品的开发 | 第17-20页 |
| 1.3.1 GABA相关食品的研究 | 第17-18页 |
| 1.3.2 茶叶中GABA的研究 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第20页 |
| 2.2 研究内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 2.2.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-35页 |
| 3.1 实验材料 | 第22页 |
| 3.1.1 取样 | 第22页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第22-26页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第22-23页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第23页 |
| 3.2.3 试剂配方 | 第23-25页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第25-26页 |
| 3.3 实验方法 | 第26-35页 |
| 3.3.1 茶树叶片不同部位的GABA含量HPLC检测的方法 | 第26页 |
| 3.3.2 茶树中总RNA的提取与检测 | 第26-27页 |
| 3.3.3 茶树中基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 3.3.4 CsGAD1的cDNA的全长的RACE方法的克隆 | 第27-28页 |
| 3.3.5 CsGAD1的原核表达 | 第28-29页 |
| 3.3.6 CsGAD1的gDNA的克隆 | 第29-32页 |
| 3.3.7 CsGAD1的启动子克隆 | 第32-33页 |
| 3.3.8 CsGAD1的定量PCR扩增 | 第33-35页 |
| 4 结果分析 | 第35-51页 |
| 4.1 '舒茶早'茶树品种叶的各个部位的GABA的含量的测定 | 第35页 |
| 4.2 '舒茶早'茶树的RNA提取及电泳检测 | 第35页 |
| 4.3 CSGAD1目的基因的3'RACE和5'RACE电泳检测及测序 | 第35-37页 |
| 4.4 CSGAD1目的基因cDNA全长的获得 | 第37-38页 |
| 4.5 CSGAD1核苷酸序列的分析 | 第38-39页 |
| 4.6 CSGAD1蛋白质序列的特征性分析 | 第39-44页 |
| 4.4.1 CsGAD1的ORF框及编码的蛋白预测 | 第39页 |
| 4.4.2 CsGAD1的氨基酸序列及理化性质分析 | 第39-40页 |
| 4.4.3 茶树中GAD1与其他植物中GAD蛋白质序列的比较 | 第40页 |
| 4.4.4 CsGAD1蛋白质的亲水/疏水性分析 | 第40-41页 |
| 4.4.5 CsGAD1蛋白质的跨膜结构预测 | 第41页 |
| 4.4.6 CsGAD1蛋白质的信号肽预测 | 第41-42页 |
| 4.4.7 CsGAD1蛋白质的磷酸化位点预测 | 第42-43页 |
| 4.4.8 蛋白质二级结构预测 | 第43页 |
| 4.4.9 蛋白质亚细胞定位预测 | 第43-44页 |
| 4.4.10 CsGAD1的蛋白序列进化分析 | 第44页 |
| 4.7 CSGAD1基因的原核表达 | 第44-47页 |
| 4.5.1 CSGAD1完整的开放阅读框的获得及电泳检测 | 第44-45页 |
| 4.5.2 CSGAD1的重组DNA的获得 | 第45-46页 |
| 4.5.3 pMAL-C4X-CsGAD1重组蛋白的检测 | 第46页 |
| 4.5.4 重组蛋白酶活的测定 | 第46-47页 |
| 4.8 茶树中GAD1的gDNA克隆及序列分析 | 第47页 |
| 4.9 CSGAD1在茶树中各个组织器官中的qRT-PCR结果 | 第47-48页 |
| 4.10 CSGAD1的启动子克隆及功能验证 | 第48-51页 |
| 4.10.1 CsGAD1的启动子克隆 | 第48页 |
| 4.10.2 CsGAD1的启动子序列相关的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| 4.10.3 关于ABA响应元件ABRE的功能验证 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-53页 |
| 5.1 CSGAD1全长序列的获得及cDNA核苷酸序列生物信息学分析 | 第51页 |
| 5.2 CSGAD1的原核表达及重组蛋白的检测 | 第51页 |
| 5.3 CSGAD1的gDNA克隆 | 第51页 |
| 5.4 茶树中不同组织器官的GAD1的qRT-PCR | 第51-52页 |
| 5.5 CSGAD1的非编码区的启动子的克隆及功能分析及验证 | 第52-53页 |
| 6 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第60-61页 |
| 图表清单 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-69页 |
| 附录A 茶树中不同叶位的GABA检测的标准曲线图 | 第62-63页 |
| 附录B 茶树中CSGAD1的gDNA序列与CDNA序列的比对结果 | 第63-68页 |
| 附录C 茶树中CSGAD1定量PCR引物标准曲线及融解曲线 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 研究生在读期间发表的学术论文 | 第71页 |
