| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 孤雌生殖种群简介 | 第10-11页 |
| 1.3 抗菌肽简介 | 第11-12页 |
| 1.4 昆虫抗菌肽简介 | 第12-13页 |
| 1.5 展望 | 第13-15页 |
| 第二章 长角血蜱孤雌种群防御素基因的分子克隆 | 第15-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第15页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第15页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第15页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-21页 |
| 2.2.1 长角血蜱孤雌生殖种群总RNA的提取 | 第15-16页 |
| 2.2.2 cDNA文库的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.2.1 建库试剂盒构建 | 第16-17页 |
| 2.2.2.2 3’RACE反转获得cDNA | 第17-18页 |
| 2.2.3 抗菌肽基因的克隆 | 第18-21页 |
| 2.2.4 抗菌肽基因的全长的扩增 | 第21页 |
| 2.3 实验结果 | 第21-28页 |
| 2.3.1 长角血蜱孤雌生殖种群总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.2 cDNA文库的构建 | 第22页 |
| 2.3.3 抗菌肽基因的克隆 | 第22-24页 |
| 2.3.4 抗菌肽基因的生物信息学分析 | 第24-28页 |
| 2.3.4.1 基因序列分析 | 第24-26页 |
| 2.3.4.2 Hp-defensin13 的系统发育树分析 | 第26页 |
| 2.3.4.3 蛋白序列分析 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 2.4.1 抗菌肽基因的克隆 | 第28页 |
| 2.4.2 抗菌肽的生物学分析 | 第28-30页 |
| 第三章 长角血蜱孤雌种群防御素基因的原核表达 | 第30-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 实验试剂及耗材 | 第30页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 3.2.1 构建Defensin基因的原核表达载体 | 第30-33页 |
| 3.2.2 重组质粒pET-32(a＋)- defensin的诱导表达 | 第33-36页 |
| 3.2.3 重组蛋白的质谱鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.4 重组蛋白诱导表达的条件优化 | 第37页 |
| 3.2.5 重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.5.1 重组蛋白的大量收集 | 第37页 |
| 3.2.5.2 装柱准备 | 第37-38页 |
| 3.2.5.3 蛋白上清的亲和层析 | 第38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-44页 |
| 3.3.1 构建Defensin基因的原核表达载体 | 第38-40页 |
| 3.3.2 重组质粒pET-32(a＋)- defensin的诱导表达 | 第40-41页 |
| 3.3.3 重组蛋白诱导表达的条件优化 | 第41-44页 |
| 3.3.4 重组蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3.4.1 原核表达载体的选择与构建 | 第44-45页 |
| 3.4.2 蛋白诱导表达条件的优化与纯化 | 第45-46页 |
| 第四章 长角血蜱孤雌种群防御素的功能分析 | 第46-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 实验试剂及耗材 | 第46页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-51页 |
| 4.2.1 长角血蜱孤雌生殖种群防御素基因表达量的分析 | 第46-48页 |
| 4.2.1.1 防御素基因在不同时期不同组织中的表达量 | 第46-47页 |
| 4.2.1.2 防御素基因不同菌胁迫下的表达量 | 第47-48页 |
| 4.2.2 抑菌活性的分析 | 第48-50页 |
| 4.2.3 抗氧化的分析 | 第50-51页 |
| 4.2.4 溶血活性的分析 | 第51页 |
| 4.3 实验结果 | 第51-59页 |
| 4.3.1 长角血蜱孤雌生殖种群防御素基因表达量的分析 | 第51-54页 |
| 4.3.2 抑菌活性的分析 | 第54-57页 |
| 4.3.3 抗氧化的分析 | 第57-58页 |
| 4.3.4 溶血活性的分析 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 4.4.1 防御素基因的定量分析 | 第59-60页 |
| 4.4.2 HP-defensin-1 重组蛋白的功能分析 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第67页 |
