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通过二次抑制差减杂交方法克隆和鉴定大豆耐盐相关基因

摘要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 绪论第14-28页
   ·盐胁迫对植物生长发育及生理代谢的影响第14-15页
     ·盐胁迫对植物生长发育的影响第14页
     ·盐胁迫对植物新陈代谢的影响第14-15页
   ·提高大豆耐盐性的途径第15-17页
     ·栽培技术措施第15-16页
     ·耐盐品种的筛选与鉴定第16页
     ·杂交育种第16页
     ·转基因育种第16-17页
   ·植物耐盐相关基因的研究第17-20页
     ·渗透调节物质的合成与积累第17页
     ·晚期胚胎发生富集蛋白基因(LEA 基因)第17-18页
     ·活性氧清除酶类基因第18页
     ·水通道蛋白相关基因第18-19页
     ·与耐盐相关的蛋白激酶类基因第19页
     ·与耐盐相关的转录因子基因第19页
     ·离子转运相关的基因第19-20页
   ·基因差异表达方法的研究第20-24页
     ·mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR)第20页
     ·基因表达的系统分析(serial analysis of gene expression,SAGE)第20页
     ·代表性差异分析技术(representaional difference analysis,RDA)第20-21页
     ·基因芯片第21页
     ·抑制差减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)第21-24页
   ·生物信息学第24-26页
     ·生物数据库第24-25页
     ·生物信息学分析相关软件第25-26页
   ·发根农杆菌介导的豆科植物的发状根转化第26-28页
     ·发状根转化系统的特点第26页
     ·pGFPGUSplus 发根农杆菌表达载体的特点第26-28页
第二章 采用再次抑制差减杂交的方法,筛选与克隆大豆耐盐基因第28-44页
   ·材料第28-29页
     ·植物材料第28页
     ·主要试剂第28页
     ·序列分析使用的软件和网站第28-29页
   ·试验方法第29-33页
     ·大豆幼苗的盐处理第29页
     ·总RNA 的提取第29页
     ·总RNA 的纯化第29页
     ·mRNA 的分离第29-30页
     ·构建抑制差减文库第30-31页
     ·cDNA 文库插入片段的扩增第31页
     ·杂交膜的制备第31-32页
     ·标记探针第32页
     ·斑点杂交检测第32页
     ·序列的测定和分析第32-33页
     ·Real-time PCR 检测第33页
   ·结果与分析第33-41页
     ·取样时间的摸索第33页
     ·总RNA 的提取第33-34页
     ·抑制差减文库的构建第34页
     ·差减效率的检测第34-35页
     ·抑制差减文库插入片段的初步检测第35页
     ·阳性克隆的测序和序列分析第35-36页
     ·文库SSH1 和SSH2 之间的比对分析第36页
     ·斑点杂交分析第36-37页
     ·GO 基因的功能注释第37-39页
     ·COG 功能分类第39-40页
     ·Real-time PCR 分析结果第40-41页
   ·讨论第41-44页
     ·SSH 技术的优点和不足第41页
     ·SSH 技术的改良第41-42页
     ·再次抑制差减文库的构建与分析第42-44页
第三章 大豆耐盐相关基因的克隆与功能分析第44-64页
   ·材料第44-46页
     ·植物材料第44页
     ·主要试剂、菌株和载体第44-45页
     ·基本溶液的配制第45页
     ·主要仪器设备第45-46页
   ·试验方法第46-52页
     ·基因克隆第46页
     ·Real-time PCR 分析第46-47页
     ·GmSLT 表达载体的构建第47-49页
     ·大豆转基因发状根的获得第49-50页
     ·复合体大豆植株的获得第50-51页
     ·大豆转基因发状根的耐盐性分析第51-52页
   ·结果与分析第52-60页
     ·GmTrx 基因的克隆第52-54页
     ·GmSLT 基因的克隆第54-56页
     ·GmSLT 基因表达载体的构建第56-57页
     ·GmSLT 基因的功能分析第57-60页
   ·讨论第60-64页
     ·差异基因的获得第60-61页
     ·GmTrx 基因的序列分析和功能预测第61页
     ·GmSLT 基因的序列分析和功能预测第61-62页
     ·GmSLT 基因的功能分析第62-64页
第四章 结论第64-65页
参考文献第65-75页
致谢第75-76页
作者简历第76页

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