| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-26页 |
| ·病毒由来 | 第15-17页 |
| ·博卡病毒属由来 | 第15页 |
| ·博卡病毒的发现 | 第15-17页 |
| ·病原基本特征 | 第17-19页 |
| ·博卡病毒流行病学 | 第19-23页 |
| ·传播途径及分布 | 第19-20页 |
| ·流行季节 | 第20-21页 |
| ·年龄分布 | 第21页 |
| ·血清流行病学 | 第21页 |
| ·分子流行病学 | 第21-23页 |
| ·致病性和共感染 | 第23-24页 |
| ·呼吸道疾病 | 第23-24页 |
| ·肠道疾病 | 第24页 |
| ·混合感染 | 第24页 |
| ·博卡病毒的诊断 | 第24-25页 |
| ·分子诊断 | 第24页 |
| ·免疫诊断 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 我国部分地区猪细小病毒4型的流行病学研究 | 第26-39页 |
| ·材料与方法 | 第26-31页 |
| ·样品信息 | 第26页 |
| ·主要试剂（盒） | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第27页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·普通PCR | 第28页 |
| ·PPV4的全基因组扩增 | 第28-29页 |
| ·目的片段克隆载体测序 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化（热激法） | 第30页 |
| ·重组质粒的提取 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·共感染检测 | 第30-31页 |
| ·数据分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-38页 |
| ·普通PCR检测PPV4扩增结果 | 第31页 |
| ·检测样本流行病学调查 | 第31-33页 |
| ·PPV4的全基因组扩增 | 第33-34页 |
| ·PPV4全基因组阳性质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·基因组特征 | 第34-35页 |
| ·序列分析 | 第35-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 PPV4感染猪动物实验 | 第39-49页 |
| ·材料和方法 | 第39-42页 |
| ·毒株与阳性病料 | 第39页 |
| ·仪器和试剂 | 第39页 |
| ·引物和探针的设计合成 | 第39页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第39页 |
| ·普通PCR反应 | 第39-40页 |
| ·质粒标准阳性模板的制备 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR反应的优化 | 第40页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第40-41页 |
| ·TaqMan荧光PCR的重复性、敏感性、特异性 | 第41页 |
| ·动物实验 | 第41页 |
| ·TaqMan荧光PCR对PPV4感染细胞上清的检测 | 第41-42页 |
| ·PPV4病毒粒子观察 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-48页 |
| ·VP2基因的克隆及鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第43页 |
| ·反应体系中各组分的优化和条件的优化 | 第43页 |
| ·标准曲线制作 | 第43-44页 |
| ·Real-time PCR重复性、敏感性、特异性试验 | 第44-45页 |
| ·TaqMan荧光PCR对实验动物猪的检测 | 第45-47页 |
| ·TaqMan荧光PCR对感染阳性样品的细胞培养物检测 | 第47页 |
| ·病毒粒子电镜观察 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 PPV4 NS蛋白的表达 | 第49-57页 |
| ·材料和方法 | 第49-53页 |
| ·细胞、菌株、质粒 | 第49页 |
| ·载体与试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂和溶液的配置 | 第49-50页 |
| ·真核和原核表达质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·细胞培养 | 第51页 |
| ·细胞转染 | 第51页 |
| ·间接免疫荧光（IFA） | 第51-52页 |
| ·NS蛋白的原核表达 | 第52页 |
| ·NS蛋白的纯化 | 第52页 |
| ·Western-Blot分析 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-56页 |
| ·PCR扩增目的片段NS、VP和NP | 第53页 |
| ·IFA检测结果 | 第53-54页 |
| ·NS蛋白SDS-PAGE电泳 | 第54-55页 |
| ·NS蛋白纯化结果 | 第55-56页 |
| ·NS蛋白Western-Blot结果 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| ·中国首次检出PPV4 | 第57页 |
| ·PPV4的致病性和组织嗜性 | 第57页 |
| ·准确表达PPV4的NS蛋白 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |
