| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1. 甲型流感病毒复制机理 | 第11-16页 |
| 1.1. 病毒吸附于宿主细胞 | 第11-12页 |
| 1.2. 病毒内吞进入宿主细胞 | 第12-13页 |
| 1.3. 病毒转录和翻译的过程 | 第13-14页 |
| 1.4. 病毒vRNPs出核和胞质内转运的过程 | 第14-15页 |
| 1.5. 病毒包装、出芽和释放的过程 | 第15-16页 |
| 2. 真核翻译起始因子eIF4B的研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1. 真核翻译起始因子eIF4B对细胞生存和增殖的影响 | 第18页 |
| 2.2. 真核翻译起始因子eIF4B与病毒复制的相关性研究 | 第18-19页 |
| 3. 本课题研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 甲型流感病毒感染对eIF4B蛋白表达的影响 | 第21-33页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-27页 |
| 1.1. 试验材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1. 细胞株 | 第21页 |
| 1.1.2. 试验动物 | 第21页 |
| 1.1.3. 主要试验试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.4. 主要试验仪器 | 第22-23页 |
| 1.2. 试验方法 | 第23-27页 |
| 1.2.1. 细胞培养 | 第23-24页 |
| 1.2.1.1. 贴壁细胞传代 | 第23页 |
| 1.2.1.2. 细胞冻存 | 第23页 |
| 1.2.1.3. 细胞复苏 | 第23-24页 |
| 1.2.2. 病毒感染细胞 | 第24页 |
| 1.2.3. 免疫印迹(Western blot) | 第24-25页 |
| 1.2.3.1. 蛋白样品的制备 | 第24页 |
| 1.2.3.2. 电泳 | 第24页 |
| 1.2.3.3. 转膜、封闭 | 第24-25页 |
| 1.2.3.4.抗体孵育 | 第25页 |
| 1.2.3.5. 化学发光检测 | 第25页 |
| 1.2.4. RT-PCR法检测目的基因mRNA的相对表达量 | 第25-26页 |
| 1.2.4.1. RNA提取 | 第25-26页 |
| 1.2.4.2. 反转录 | 第26页 |
| 1.2.4.3. PCR检测目的基因mRNA的表达情况 | 第26页 |
| 1.2.5. 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)制备方法 | 第26-27页 |
| 2. 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.1. 流感病毒感染对A549细胞中eIF4B表达的影响 | 第27-28页 |
| 2.2. 流感病毒感染对MEFs细胞中eIF4B表达的影响 | 第28-29页 |
| 2.3. 流感病毒感染对小鼠组织中eIF4B表达的影响 | 第29-30页 |
| 3. 讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 eIF4B在甲型流感病毒复制中的作用 | 第33-57页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-41页 |
| 1.1. 试验材料 | 第33页 |
| 1.1.1. 质粒与菌种 | 第33页 |
| 1.1.2. 引物序列 | 第33页 |
| 1.1.3. 细胞株 | 第33页 |
| 1.1.4. 试验动物 | 第33页 |
| 1.2. 试验方法 | 第33-41页 |
| 1.2.1. 制备感受态菌体(CaCl_2法) | 第33-34页 |
| 1.2.2. 构建质粒 | 第34-36页 |
| 1.2.2.1. 扩增目的片段 | 第34-35页 |
| 1.2.2.2. 切胶回收目的片段 | 第35页 |
| 1.2.2.3. 载体和目的片段酶切处理 | 第35-36页 |
| 1.2.2.4. 连接反应 | 第36页 |
| 1.2.2.5. 转化 | 第36页 |
| 1.2.3. 质粒提取 | 第36-38页 |
| 1.2.3.1. 质粒小提(TIANGEN质粒小提试剂盒) | 第36-37页 |
| 1.2.3.2. 质粒高纯度中提(TIANGEN高纯度质粒小提中量试剂盒) | 第37-38页 |
| 1.2.4. 细胞转染 | 第38页 |
| 1.2.5. 病毒包装及稳定细胞系的构建 | 第38-39页 |
| 1.2.5.1. 制备病毒颗粒 | 第38-39页 |
| 1.2.5.2. 感染细胞并建立稳定细胞系 | 第39页 |
| 1.2.6. 病毒空斑测定实验 | 第39-40页 |
| 1.2.7. 转基因小鼠鉴定 | 第40-41页 |
| 1.2.7.1. 小鼠尾基因组DNA提取 | 第40页 |
| 1.2.7.2. PCR检测转基因小鼠的阳性率 | 第40-41页 |
| 2. 结果与分析 | 第41-56页 |
| 2.1. eIF4B在流感病毒复制中的作用 | 第41-48页 |
| 2.1.1. 病毒包装质粒的构建 | 第41-43页 |
| 2.1.1.1. 构建eIF4B干扰质粒 | 第41-42页 |
| 2.1.1.2. 构建eIF4B过表达质粒 | 第42-43页 |
| 2.1.2. eIF4B干扰及过表达细胞系的建立 | 第43-45页 |
| 2.1.2.1. 建立eIF4B干扰细胞系 | 第43-44页 |
| 2.1.2.2. 建立eIF4B过表达细胞系 | 第44-45页 |
| 2.1.3. 流感病毒在干扰及过表达eIF4B细胞系内复制的情况 | 第45-48页 |
| 2.1.3.1. 干扰eIF4B对流感病毒复制的影响 | 第45-46页 |
| 2.1.3.2. 过表达eIF4B对流感病毒复制的影响 | 第46-48页 |
| 2.2 干扰eIF4B转基因小鼠对流感病毒的抵抗力 | 第48-56页 |
| 2.2.1. 流感病毒在转基因小鼠MEFs细胞中的复制情况 | 第49-51页 |
| 2.2.2. 干扰eIF4B转基因小鼠鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.3. 检测转基因小鼠对流感病毒的抵抗力 | 第52-56页 |
| 3. 讨论 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 本论文创新点与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第73页 |
