| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第12-32页 |
| 1.1 芜菁花叶病毒的研究概况 | 第12-24页 |
| 1.1.1 芜菁花叶病毒的普通生物学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 马铃薯Y病毒属的分子生物学 | 第13-21页 |
| 1.1.3 马铃薯Y病毒的复制 | 第21-22页 |
| 1.1.4 马铃薯Y病毒的运动 | 第22-24页 |
| 1.2 本文涉及到的主要技术体系 | 第24-30页 |
| 1.2.1 丙氨酸扫描诱变技术 | 第24页 |
| 1.2.2 原生质体转染技术 | 第24-26页 |
| 1.2.3 病毒cDNA侵染性克隆技术 | 第26-27页 |
| 1.2.4 酵母双杂交技术 | 第27-28页 |
| 1.2.5 双分子荧光互补技术 | 第28-30页 |
| 1.3 立题依据和课题研究的意义 | 第30-32页 |
| 第二章 芜菁花叶病毒CI蛋白参与病毒复制的功能域分析 | 第32-52页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 材料和方法 | 第32-46页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第32页 |
| 2.2.2 供试菌株及主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 引物设计和突变体侵染性克隆的构建 | 第33-42页 |
| 2.2.4 无内毒素质粒大量提取 | 第42-43页 |
| 2.2.5 原生质体转染 | 第43-44页 |
| 2.2.6 RT-qPCR检测TuMV CI突变体在原生质体中的复制量 | 第44-46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 2.3.1 原生质体活力检测 | 第46-47页 |
| 2.3.2 CI结构分析 | 第47-48页 |
| 2.3.3 DEXDc、HELICc结构域和C端都是CI参与病毒复制必需的 | 第48-50页 |
| 2.4 小结和讨论 | 第50-52页 |
| 第三章 芜菁花叶病毒CI蛋白参与病毒胞间运动和长距离运动的功能域分析 | 第52-72页 |
| 3.1 前言 | 第52页 |
| 3.2 材料和方法 | 第52-59页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 3.2.2 质粒构建 | 第53-54页 |
| 3.2.3 农杆菌电转感受态制备 | 第54-55页 |
| 3.2.4 农杆菌电击转化 | 第55页 |
| 3.2.5 PCR检测阳性菌落 | 第55-56页 |
| 3.2.6 农杆菌接种本氏烟 | 第56页 |
| 3.2.7 共聚焦显微镜(Confocal Microscope)观察 | 第56-57页 |
| 3.2.8 DAS-ELISA | 第57页 |
| 3.2.9 Trizol法提取植物总RNA | 第57-58页 |
| 3.2.10 电子显微镜观察病毒粒子 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-70页 |
| 3.3.1 CI蛋白的N端是病毒胞间运动必需的 | 第59-62页 |
| 3.3.2 病毒系统运动需要高效的胞间运动 | 第62-66页 |
| 3.3.3 CI与P3N-PIPO和CP的相互作用 | 第66-70页 |
| 3.4 小结和讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 与CI蛋白互作的寄主因子及其对TuMV侵染植物的影响 | 第72-95页 |
| 4.1 前言 | 第72-73页 |
| 4.2 材料和方法 | 第73-81页 |
| 4.2.1 试验材料 | 第73页 |
| 4.2.2 质粒构建 | 第73页 |
| 4.2.3 酵母双杂交筛选试验 | 第73-76页 |
| 4.2.4 BiFC验证与CI互作的基因 | 第76-78页 |
| 4.2.5 PCR筛选拟南芥突变体纯合子 | 第78-80页 |
| 4.2.6 TuMV摩擦接种拟南芥及其突变体 | 第80-81页 |
| 4.3 结果与分析 | 第81-91页 |
| 4.3.1 酵母双杂交筛选与TuMV CI互作的蛋白 | 第81-84页 |
| 4.3.2 BiFC验证与CI互作的基因 | 第84-87页 |
| 4.3.3 PCR筛选拟南芥突变体纯合子 | 第87-91页 |
| 4.3.4 拟南芥突变体中病毒积累量的影响 | 第91页 |
| 4.4 小结和讨论 | 第91-95页 |
| 第五章 结论 | 第95-97页 |
| 5.1 CI蛋白的功能位点研究 | 第95页 |
| 5.2 CI蛋白与寄主因子的互作研究 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-114页 |
| 附录1 缩略词表 | 第114-117页 |
| 附录2 本研究中的溶液配方 | 第117-121页 |
| 附录3 攻博期间发表的文章, | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
