| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1. 果蝇中cad基因的发现和功能 | 第15页 |
| 2. 哺乳动物cdx基因的发现 | 第15-17页 |
| 2.1 Cdx1基因的发现和研究现状 | 第15-16页 |
| 2.2 cdx2基因的发现和研究现状 | 第16-17页 |
| 2.3 cdx4基因的发现和研究现状 | 第17页 |
| 3. 哺乳动物的心脏发育的基本过程 | 第17-20页 |
| 4. 心外膜与心脏发育 | 第20-26页 |
| 4.1 心外膜的解剖学发现 | 第20-21页 |
| 4.2. 胚胎心外膜的起源-原心外膜细胞(proepicardium,PE) | 第21-22页 |
| 4.3 心外膜细胞的上皮-间质细胞转化(Epithelial MesenchymalTransition,EMT) | 第22-24页 |
| 4.4. 胚胎发育中心外膜的功能 | 第24-26页 |
| 4.4.1 心外膜与心肌 | 第25-26页 |
| 4.4.2 心外膜与血管形成 | 第26页 |
| 4.4.3 心外膜与成纤维细胞形成 | 第26页 |
| 5. 心外膜与成体心脏 | 第26-29页 |
| 5.1 心外膜中存在成体心脏干细胞 | 第27页 |
| 5.2 心外膜相关的疾病 | 第27页 |
| 5.3 心外膜与心脏再生 | 第27-29页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第29-55页 |
| 1. 转基因小鼠的构建、鉴定和使用 | 第29-40页 |
| 1.1 实验原理 | 第29页 |
| 1.2 转基因小鼠载体的克隆构建 | 第29-34页 |
| 1.2.1 质粒与菌种 | 第29页 |
| 1.2.2 主要试剂和仪器 | 第29-31页 |
| 1.2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 1.3 转基因小鼠ES细胞的获得与鉴定 | 第34-38页 |
| 1.3.1 实验试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 1.3.2 实验试剂的配制 | 第35-36页 |
| 1.3.3 实验方法 | 第36-38页 |
| 1.4 转基因小鼠的囊胚注射 | 第38页 |
| 1.5 嵌合小鼠的基因型鉴定 | 第38-40页 |
| 1.5.1 实验试剂和仪器 | 第38-39页 |
| 1.5.2 实验试剂的配制 | 第39页 |
| 1.5.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 1.6 理想型小鼠的获得、鉴定和饲养 | 第40页 |
| 1.7. 实验使用小鼠的药物诱导 | 第40页 |
| 2. RNA抽取、反转和PCR | 第40-43页 |
| 2.1 主要试剂与仪器 | 第41页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第41页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 2.2.1 RNA抽提 | 第41-42页 |
| 2.2.2 RNA反转录 | 第42页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第42页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR | 第42-43页 |
| 3. 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第43-46页 |
| 3.1 主要试剂与仪器 | 第43-44页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.1.3 主要抗体 | 第43-44页 |
| 3.2 试剂配制 | 第44-45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-46页 |
| 4. 免疫学实验 | 第46-48页 |
| 4.1 主要试剂与仪器 | 第46页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 4.1.3 主要抗体 | 第46页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 免疫细胞荧光(Immunocytofluroresence,ICF) | 第46-47页 |
| 4.2.2 免疫组织荧光(Immunohistofluroresence,IHF) | 第47-48页 |
| 5. 心外膜细胞的获得以及培养 | 第48页 |
| 5.1 主要试剂与仪器 | 第48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48页 |
| 6. 组织HE染色 | 第48-49页 |
| 6.1 主要试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 6.2 实验方法 | 第49页 |
| 7. CMFDA培养观察心外膜细胞的迁移 | 第49-50页 |
| 7.1 主要试剂与仪器 | 第49-50页 |
| 7.1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 7.1.2 主要仪器 | 第49页 |
| 7.1.3 试剂配制 | 第49-50页 |
| 7.2 实验方法 | 第50页 |
| 8. 心外膜细胞的体外迁移侵袭实验 | 第50-51页 |
| 8.1 主要试剂与仪器 | 第50页 |
| 8.1.1 主要试剂 | 第50页 |
| 8.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 8.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 8.2.1 细胞划痕实验(Scratch Assay) | 第50-51页 |
| 9. 细胞周期的检测 | 第51-52页 |
| 9.1 主要试剂与仪器 | 第51页 |
| 9.1.1 主要试剂 | 第51页 |
| 9.1.2 主要仪器 | 第51页 |
| 9.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 9.2.1 使用Brdu的方法确定细胞周期变化 | 第51-52页 |
| 10. 心脏的整体免疫组化成色 | 第52-53页 |
| 10.1 主要试剂与仪器 | 第52页 |
| 10.1.1 主要试剂 | 第52页 |
| 10.1.2 主要抗体 | 第52页 |
| 10.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 10.2 实验方法 | 第52-53页 |
| 11. RNAseq的基因表达谱分析 | 第53页 |
| 11.1 主要试剂与仪器 | 第53页 |
| 11.2 实验方法 | 第53页 |
| 12. siRNA基因抑制实验 | 第53-55页 |
| 12.1 主要试剂与仪器 | 第54页 |
| 12.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果 | 第55-70页 |
| 1. Cdx1在心外膜细胞发挥功能的时间框中表达,且表达于心脏的心外膜 | 第55-56页 |
| 2. Cdx1的条件诱导型转基因小鼠的构建和可诱导性确定 | 第56-59页 |
| 3. 在转基因小鼠胚胎发育的E11.5,体外实验中,Cdx1的过表达影响心外膜细胞的形态和EMT相关基因的表达 | 第59-61页 |
| 4. 在转基因小鼠胚胎发育的E11.5,体内实验中,Cdx1的过表达导致心外膜细胞的消失和类心外膜获得细胞数量的增多 | 第61-63页 |
| 5. Cdx1的持续性过表达抑制了心外膜获得细胞的进一步分化及迁移 | 第63-65页 |
| 6. 在转基因小鼠胚胎发育的E11.5,体内实验中,Cdx1的过表达导致心外膜细胞的消失,进一步影响了心外膜细胞的功能,冠状动脉的形成和心肌壁的增厚 | 第65-67页 |
| 7. 心外膜发育前期cdx1基因的瞬时高表达促进EMT,但是不影响心外膜获得细胞的迁移 | 第67-70页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第70-75页 |
| 附录Ⅰ 缩略词表 | 第75-76页 |
| 附录Ⅱ 实验所用引物序列 | 第76-77页 |
| 附录Ⅲ 攻读硕士期间的科研经历 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
