摘要 | 第6-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
第一章 综述 | 第14-22页 |
第一节 染色质重塑复合物的介绍 | 第14-16页 |
第二节 染色质重塑复合物的生物功能 | 第16-19页 |
第三节 SWI/SNF染色质重塑复合物在发育过程中的作用 | 第19-20页 |
第四节 SWI/SNF染色质重塑复合物在胚胎干细胞中的功能 | 第20-22页 |
第二章 实验材料和方法 | 第22-57页 |
第一节 实验材料 | 第22-35页 |
1. 细胞株 | 第22页 |
2. 小鼠种类 | 第22页 |
3. 菌株 | 第22-23页 |
4. 质粒 | 第23-24页 |
5. shRNA序列 | 第24-27页 |
6. 引物序列:RT-PCR,Q-RT-PCR,PCR引物 | 第27-28页 |
7. 抗体 | 第28页 |
8. 主要试剂和试剂盒 | 第28-31页 |
9. 主要仪器及实验耗材 | 第31-33页 |
10. 主要溶液配制 | 第33-35页 |
第二节 实验方法 | 第35-57页 |
1. 质粒小量提取步骤 | 第35-36页 |
2. 质粒大量提提步骤 | 第36-37页 |
3. 感受态制备 | 第37页 |
4. 感受态制备时用到的溶液配方 | 第37-38页 |
5. 细胞培养 | 第38-39页 |
6. MEF的培养及其冻存过程 | 第39页 |
7. 人类胚胎干细胞系(H1)培养时MEF的准备及其步骤 | 第39-40页 |
8. 人类胚胎干细胞系H1的复苏及其步骤 | 第40页 |
9. 人类胚胎干细胞系的传代步骤 | 第40-41页 |
10. 病毒感染人类胚胎干细胞的方法 | 第41页 |
11. MES培养和体外胚球体(EB)的培养方法 | 第41-43页 |
12. Total RNA的抽提步骤 | 第43-44页 |
13. RNA反转录成为cDNA | 第44页 |
14. 实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR) | 第44-45页 |
15. 免疫印迹杂交(Western Blotting) | 第45-48页 |
16. 流式细胞技术(Fluorescence Activating Cell Sorter) | 第48-49页 |
17. 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色方法 | 第49-50页 |
18. 稳转干扰细胞系的建立与筛选 | 第50-51页 |
19. MES核型分析方法及其步骤 | 第51-52页 |
20. 支原体的检测 | 第52-53页 |
21. BRG1诱导敲除型胚胎干细胞系建立的步骤 | 第53-54页 |
22. 免疫共沉淀(coimmunoprecipitation,Co-iP)技术 | 第54-57页 |
第三章 实验结果与分析 | 第57-77页 |
第一节 SWI/SNF染色质重塑复合物的不同亚基在HES中的不同功能及其作用机制的研究 | 第57-71页 |
第二节 BRG1诱导型敲除胚胎干细胞系的建立 | 第71-77页 |
第四章 小结与讨论 | 第77-80页 |
附录 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-88页 |
致谢 | 第88页 |