| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第7-10页 |
| 1 引言 | 第10-14页 |
| 1.1 玫瑰黄链霉菌研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 A-因子及其类似物 | 第11页 |
| 1.3 afsA 基因家族是 A-因子及其结构类似物生物合成途径中的关键基因 | 第11-12页 |
| 1.4 基因功能研究方法—基因敲除与基因转导技术 | 第12-13页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第13-14页 |
| 2 材料 | 第14-21页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第14-15页 |
| 2.2 PCR 引物 | 第15-16页 |
| 2.3 限制性内切酶与试剂盒 | 第16页 |
| 2.4 分子量标准 | 第16页 |
| 2.5 抗生素 | 第16-17页 |
| 2.6 培养基 | 第17-18页 |
| 2.7 缓冲液及试剂 | 第18-20页 |
| 2.8 常用仪器设备 | 第20-21页 |
| 3 方法 | 第21-31页 |
| 3.1 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 的菌种保存 | 第21页 |
| 3.2 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 孢子悬浮液的制备 | 第21页 |
| 3.3 碱裂解法链霉菌质粒提取[67,79] | 第21-22页 |
| 3.4 srpA 基因的克隆及原核表达 | 第22-26页 |
| 3.4.1 srpA 基因特异引物的设计 | 第22页 |
| 3.4.2 srpA 的 PCR 扩增 | 第22-23页 |
| 3.4.3 srpA 基因原核重组表达载体的构建[70,79,80] | 第23-24页 |
| 3.4.4 阳性克隆的筛选 | 第24-25页 |
| 3.4.5 srpA 基因序列的测定与分析 | 第25页 |
| 3.4.6 srpA 基因在 E. coli M15 中的诱导表达 | 第25页 |
| 3.4.7 SrpA 蛋白检测 | 第25-26页 |
| 3.5 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 srpA 基因的敲除 | 第26-31页 |
| 3.5.1 srpA 基因敲除载体的构建 | 第26-27页 |
| 3.5.2 链霉菌-大肠杆菌之间的接合转移 | 第27-28页 |
| 3.5.3 突变菌株的筛选验证 | 第28-29页 |
| 3.5.4 srpA 基因功能分析 | 第29-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-40页 |
| 4.1 srpA 基因的克隆及原核表达 | 第31-34页 |
| 4.1.1 目的基因 srpA 的克隆 | 第31页 |
| 4.1.2 srpA 基因的序列分析 | 第31-33页 |
| 4.1.3 重组表达载体 pQE30-srpA 的构建 | 第33页 |
| 4.1.4 srpA 基因在 E. coli 中的诱导表达与检测 | 第33-34页 |
| 4.2 玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 srpA 基因的敲除 | 第34-40页 |
| 4.2.1 srpAF、srpAR 的克隆 | 第34-35页 |
| 4.2.2 tsr 基因克隆 | 第35-36页 |
| 4.2.3 srpA 敲除载体 pKC1139-srpAF-tsr-srpAR 的验证 | 第36页 |
| 4.2.4 野生型及突变株玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 中 srpA 转录分析 | 第36-37页 |
| 4.2.5 srpA 缺失对链霉菌 Men-myco-93-63 液态培养条件下菌体生长的影响 | 第37-38页 |
| 4.2.6 srpA 缺失对链霉菌 Men-myco-93-63 菌落形态的影响 | 第38-39页 |
| 4.2.7 srpA 缺失对链霉菌 Men-myco-93-63 抗生素生产能力的影响 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-41页 |
| 6 结论 | 第41-42页 |
| 7 参考文献 | 第42-47页 |
| 作者简历 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 在读期间发表的学术论文: | 第49-50页 |
