磷脂酶C在枯草芽胞杆菌中的表达与定向进化
| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 磷脂酶 | 第13-20页 |
| 1.1.1 磷脂 | 第13-14页 |
| 1.1.2 磷脂酶 | 第14-16页 |
| 1.1.3 磷脂酶C研究现状 | 第16-20页 |
| 1.2 油脂处理 | 第20-24页 |
| 1.2.1 油脂处理的意义 | 第20页 |
| 1.2.2 油脂脱胶 | 第20-23页 |
| 1.2.3 油脂精炼 | 第23-24页 |
| 1.3 表达系统的研究 | 第24-28页 |
| 1.3.1 不同宿主优劣比较 | 第24-25页 |
| 1.3.2 枯草芽胞杆菌常用表达体系 | 第25-27页 |
| 1.3.3 枯草芽胞杆菌转化方法 | 第27-28页 |
| 1.4 定向进化 | 第28-29页 |
| 1.5 本课题研究内容与立题意义 | 第29-31页 |
| 2 表达体系改造及验证 | 第31-50页 |
| 2.1 材料及实验方法 | 第31-42页 |
| 2.1.1 材料 | 第31-33页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第33-42页 |
| 2.2 结果 | 第42-49页 |
| 2.2.1 质粒改造 | 第42-45页 |
| 2.2.2 表达体系可行性验证 | 第45-49页 |
| 2.3 讨论 | 第49-50页 |
| 3 磷脂酶C的表达 | 第50-62页 |
| 3.1 材料及实验方法 | 第50-57页 |
| 3.1.1 材料 | 第50-52页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 3.2 结果 | 第57-60页 |
| 3.2.1 克隆构建及蛋白表达 | 第57-58页 |
| 3.2.2 活性检测 | 第58-59页 |
| 3.2.3 枯草芽胞杆菌稳定性检测 | 第59-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-62页 |
| 4 高通量筛选方法的建立 | 第62-73页 |
| 4.1 材料及实验方法 | 第62-67页 |
| 4.1.1 材料 | 第62-63页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第63-67页 |
| 4.2 结果 | 第67-71页 |
| 4.2.1 碱性磷酸酶的诱导表达 | 第67-68页 |
| 4.2.2 碱性磷酸酶的表达优化 | 第68-69页 |
| 4.2.3 碱性磷酸酶的活性检测 | 第69-70页 |
| 4.2.4 高通量筛选方法可行性验证 | 第70-71页 |
| 4.3 讨论 | 第71-73页 |
| 5 定向进化 | 第73-86页 |
| 5.1 材料及实验方法 | 第73-79页 |
| 5.1.1 材料 | 第73-74页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第74-79页 |
| 5.2 结果 | 第79-84页 |
| 5.2.1 转化条件优化 | 第79-80页 |
| 5.2.2 易错PCR条件确定 | 第80-81页 |
| 5.2.3 定向进化结果 | 第81-84页 |
| 5.3 讨论 | 第84-86页 |
| 6 结论与展望 | 第86-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录 | 第97-102页 |
| a.磷脂酶C蛋白及基因全序列 | 第97-98页 |
| b.原始质粒全序列 | 第98-102页 |
