摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-10页 |
第一章 绪论 | 第10-22页 |
·可卡因-安非他明调节转录肽(CART) | 第10-13页 |
·CART 肽的的发现与分布 | 第10-11页 |
·CART 的基因结构及其转录调节 | 第11-12页 |
·CART 在摄食和肥胖过程中的作用 | 第12页 |
·CART 对食欲和体脂含量的调节机制 | 第12-13页 |
·Agouti 相关蛋白(AgRP) | 第13-16页 |
·AgRP 肽的的发现与分布 | 第13-14页 |
·AgRP 的基因结构及其转录调节 | 第14页 |
·AgRP 蛋白参与摄食和肥胖的发生 | 第14-15页 |
·AgRP 对食欲和体脂含量的调节机制 | 第15-16页 |
·启动子研究进展 | 第16-20页 |
·启动子及其特征 | 第16-17页 |
·启动子的克隆和分析 | 第17-20页 |
·本论文的研究内容与意义 | 第20-21页 |
·技术路线 | 第21-22页 |
第二章 猪 CART 基因启动子的克隆和调控区的鉴定 | 第22-46页 |
·引言 | 第22页 |
·材料 | 第22-25页 |
·细胞株、菌株和载体 | 第22页 |
·工具酶、试剂和分子生物学试剂盒 | 第22-23页 |
·试剂配制 | 第23-25页 |
·主要仪器设备 | 第25页 |
·方法 | 第25-34页 |
·BAC 文库的筛选 | 第25-26页 |
·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序 | 第26-27页 |
·转录起始位点和转录因子结合位点的预测 | 第27-28页 |
·启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建 | 第28-32页 |
·细胞培养 | 第32-33页 |
·细胞瞬时转染 | 第33页 |
·双荧光素酶报告基因活性测定 | 第33-34页 |
·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第34页 |
·结果与分析 | 第34-42页 |
·BAC 文库的筛选 | 第34页 |
·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序 | 第34-37页 |
·转录起始位点和转录因子结合位点的预测 | 第37-38页 |
·CART 基因启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建 | 第38-40页 |
·细胞瞬时转染与启动子活性分析 | 第40-41页 |
·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第41-42页 |
·讨论 | 第42-45页 |
·小结 | 第45-46页 |
第三章 猪 AgRP 基因启动子的克隆和调控区的鉴定 | 第46-63页 |
·引言 | 第46页 |
·材料 | 第46页 |
·细胞株、菌株和载体 | 第46页 |
·工具酶、试剂和分子生物学试剂盒 | 第46页 |
·试剂配制 | 第46页 |
·主要仪器设备 | 第46页 |
·方法 | 第46-53页 |
·BAC 文库的筛选 | 第46-47页 |
·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序 | 第47-48页 |
·转录起始位点和转录因子结合位点的预测 | 第48页 |
·启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建 | 第48-52页 |
·细胞培养 | 第52页 |
·细胞瞬时转染 | 第52页 |
·荧光素酶活性测定 | 第52-53页 |
·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第53页 |
·结果与分析 | 第53-60页 |
·BAC 文库的筛选 | 第53页 |
·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序 | 第53-56页 |
·转录起始位点和转录因子结合位点的预测 | 第56-57页 |
·AgRP 基因启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建 | 第57-58页 |
·细胞瞬时转染与启动子活性分析 | 第58-59页 |
·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第59-60页 |
·讨论 | 第60-62页 |
·小结 | 第62-63页 |
第四章 猪CART 与AgRP 基因的组织表达与分布 | 第63-72页 |
·引言 | 第63页 |
·材料 | 第63-64页 |
·用于组织表达分析的样本 | 第63页 |
·分子生物学试剂 | 第63-64页 |
·方法 | 第64-67页 |
·RNA 的提取 | 第64页 |
·总RNA 检测及浓度测定 | 第64页 |
·总RNA 反转录 | 第64-65页 |
·管家基因(β-actin)验证cDNA 的合成 | 第65-66页 |
·各组织的RT-PCR 分析 | 第66-67页 |
·结果 | 第67-69页 |
·总RNA 的提取 | 第67-68页 |
·各组织的RT-PCR 分析 | 第68-69页 |
·讨论 | 第69-71页 |
·小结 | 第71-72页 |
结论 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-82页 |
攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第82-83页 |
致谢 | 第83-84页 |
答辩委员会对论文的评定意见 | 第84页 |