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猪CART和AgRP基因启动子的克隆与活性分析

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
第一章 绪论第10-22页
   ·可卡因-安非他明调节转录肽(CART)第10-13页
     ·CART 肽的的发现与分布第10-11页
     ·CART 的基因结构及其转录调节第11-12页
     ·CART 在摄食和肥胖过程中的作用第12页
     ·CART 对食欲和体脂含量的调节机制第12-13页
   ·Agouti 相关蛋白(AgRP)第13-16页
     ·AgRP 肽的的发现与分布第13-14页
     ·AgRP 的基因结构及其转录调节第14页
     ·AgRP 蛋白参与摄食和肥胖的发生第14-15页
     ·AgRP 对食欲和体脂含量的调节机制第15-16页
   ·启动子研究进展第16-20页
     ·启动子及其特征第16-17页
     ·启动子的克隆和分析第17-20页
   ·本论文的研究内容与意义第20-21页
   ·技术路线第21-22页
第二章 猪 CART 基因启动子的克隆和调控区的鉴定第22-46页
   ·引言第22页
   ·材料第22-25页
     ·细胞株、菌株和载体第22页
     ·工具酶、试剂和分子生物学试剂盒第22-23页
     ·试剂配制第23-25页
     ·主要仪器设备第25页
   ·方法第25-34页
     ·BAC 文库的筛选第25-26页
     ·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序第26-27页
     ·转录起始位点和转录因子结合位点的预测第27-28页
     ·启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建第28-32页
     ·细胞培养第32-33页
     ·细胞瞬时转染第33页
     ·双荧光素酶报告基因活性测定第33-34页
     ·凝胶阻滞实验(EMSA)第34页
   ·结果与分析第34-42页
     ·BAC 文库的筛选第34页
     ·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序第34-37页
     ·转录起始位点和转录因子结合位点的预测第37-38页
     ·CART 基因启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建第38-40页
     ·细胞瞬时转染与启动子活性分析第40-41页
     ·凝胶阻滞实验(EMSA)第41-42页
   ·讨论第42-45页
   ·小结第45-46页
第三章 猪 AgRP 基因启动子的克隆和调控区的鉴定第46-63页
   ·引言第46页
   ·材料第46页
     ·细胞株、菌株和载体第46页
     ·工具酶、试剂和分子生物学试剂盒第46页
     ·试剂配制第46页
     ·主要仪器设备第46页
   ·方法第46-53页
     ·BAC 文库的筛选第46-47页
     ·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序第47-48页
     ·转录起始位点和转录因子结合位点的预测第48页
     ·启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建第48-52页
     ·细胞培养第52页
     ·细胞瞬时转染第52页
     ·荧光素酶活性测定第52-53页
     ·凝胶阻滞实验(EMSA)第53页
   ·结果与分析第53-60页
     ·BAC 文库的筛选第53页
     ·BAC 的提取、酶切与纯化回收及测序第53-56页
     ·转录起始位点和转录因子结合位点的预测第56-57页
     ·AgRP 基因启动子5’-系列相向缺失片段重组质粒的构建第57-58页
     ·细胞瞬时转染与启动子活性分析第58-59页
     ·凝胶阻滞实验(EMSA)第59-60页
   ·讨论第60-62页
   ·小结第62-63页
第四章 猪CART 与AgRP 基因的组织表达与分布第63-72页
   ·引言第63页
   ·材料第63-64页
     ·用于组织表达分析的样本第63页
     ·分子生物学试剂第63-64页
   ·方法第64-67页
     ·RNA 的提取第64页
     ·总RNA 检测及浓度测定第64页
     ·总RNA 反转录第64-65页
     ·管家基因(β-actin)验证cDNA 的合成第65-66页
     ·各组织的RT-PCR 分析第66-67页
   ·结果第67-69页
     ·总RNA 的提取第67-68页
     ·各组织的RT-PCR 分析第68-69页
   ·讨论第69-71页
   ·小结第71-72页
结论第72-74页
参考文献第74-82页
攻读硕士学位期间取得的研究成果第82-83页
致谢第83-84页
答辩委员会对论文的评定意见第84页

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