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人参糖基转移酶基因UGT-D-3OH-1的克隆及原核表达

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
第1章 绪论第12-24页
    1.1 选题的背景及意义第12-13页
    1.2 人参皂苷的生物合成途径第13-16页
    1.3 人参皂苷Rh2第16-20页
        1.3.1 人参皂苷Rh2的结构与性质第16-17页
        1.3.2 人参皂苷Rh2的制备第17-20页
    1.4 糖基转移酶第20-21页
    1.5 大肠杆菌表达系统的研究进展第21-24页
第2章 人参糖基转移酶基因UGT-D-3OH-1 的克隆与分析第24-39页
    2.1 引言第24页
    2.2 实验材料与仪器第24-27页
        2.2.1 实验材料第24-26页
        2.2.2 实验仪器第26-27页
    2.3 实验方法第27-31页
        2.3.1 人参发根的继代培养第27页
        2.3.2 人参发根总RNA提取第27-28页
        2.3.3 人参发根cDNA的合成第28页
        2.3.4 UGT-D-3OH-1 基因的引物设计第28-29页
        2.3.5 UGT-D-3OH-1 基因的克隆与回收第29页
        2.3.6 UGT-D-3OH-1 基因克隆载体的构建及转化第29-30页
        2.3.7 克隆载体转化结果鉴定第30-31页
    2.4 结果与分析第31-37页
        2.4.1 人参总RNA提取第31-32页
        2.4.2 UGT-D-3OH-1 基因的克隆与回收第32-33页
        2.4.3 UGT-D-3OH-1 基因克隆载体的构建与鉴定第33-34页
        2.4.4 UGT-D-3OH-1 基因测序与分析第34-37页
    2.5 讨论第37-38页
    2.6 本章小结第38-39页
第3章 UGT-D-3OH-1 基因表达载体的构建与转化第39-61页
    3.1 引言第39页
    3.2 实验材料与仪器第39-42页
        3.2.1 实验材料第39-41页
        3.2.2 实验仪器第41-42页
    3.3 实验方法第42-49页
        3.3.1 菌种的扩大培养与质粒提取第42页
        3.3.2 表达载体的构建第42-45页
        3.3.3 表达载体转化至E.coli BL21(DE3)第45页
        3.3.4 工程菌的诱导表达及蛋白提取第45-46页
        3.3.5 SDS-PAGE蛋白电泳鉴定第46-47页
        3.3.6 包涵体的复性第47-48页
        3.3.7 糖基转移酶UGT-D-3OH-1 的酶活性检测第48-49页
    3.4 结果与分析第49-59页
        3.4.1 重组载体p ET-22b-UGT的筛选及鉴定第49-51页
        3.4.2 重组载体p ET-28a-UGT的筛选及鉴定第51-52页
        3.4.3 重组质粒p ET-22b-UGT和p ET-28a-UGT的测序第52页
        3.4.4 重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后的鉴定第52-54页
        3.4.5 SDS-PAGE蛋白电泳检测工程菌中目的蛋白的表达第54-56页
        3.4.6 包涵体的复性第56-57页
        3.4.7 糖基转移酶UGT-D-3OH-1 的酶活性检测第57-59页
    3.5 讨论第59-60页
    3.6 本章小结第60-61页
第4章 工程菌BL21-UGT-28a发酵条件的优化第61-72页
    4.1 引言第61页
    4.2 材料与仪器第61-62页
    4.3 实验方法第62-63页
        4.3.1 初始诱导OD600nm值对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第62页
        4.3.2 IPTG浓度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第62页
        4.3.3 诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第62-63页
        4.3.4 诱导温度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第63页
        4.3.5 最佳发酵条件下目的蛋白的表达量第63页
    4.4 结果与分析第63-71页
        4.4.1 初始诱导OD600nm值对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第63-65页
        4.4.2 IPTG浓度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第65-67页
        4.4.3 诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第67-68页
        4.4.4 诱导温度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响第68-70页
        4.4.5 最佳发酵条件下目的蛋白的表达量第70-71页
    4.5 讨论与小结第71-72页
第5章 结论与展望第72-74页
    5.1 结论第72-73页
    5.2 展望第73-74页
参考文献第74-81页
在校期间参与科研项目第81-82页
致谢第82页

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