| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 选题的背景及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 人参皂苷的生物合成途径 | 第13-16页 |
| 1.3 人参皂苷Rh2 | 第16-20页 |
| 1.3.1 人参皂苷Rh2的结构与性质 | 第16-17页 |
| 1.3.2 人参皂苷Rh2的制备 | 第17-20页 |
| 1.4 糖基转移酶 | 第20-21页 |
| 1.5 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第21-24页 |
| 第2章 人参糖基转移酶基因UGT-D-3OH-1 的克隆与分析 | 第24-39页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第24-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 人参发根的继代培养 | 第27页 |
| 2.3.2 人参发根总RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.3.3 人参发根cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.3.4 UGT-D-3OH-1 基因的引物设计 | 第28-29页 |
| 2.3.5 UGT-D-3OH-1 基因的克隆与回收 | 第29页 |
| 2.3.6 UGT-D-3OH-1 基因克隆载体的构建及转化 | 第29-30页 |
| 2.3.7 克隆载体转化结果鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.4.1 人参总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.4.2 UGT-D-3OH-1 基因的克隆与回收 | 第32-33页 |
| 2.4.3 UGT-D-3OH-1 基因克隆载体的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.4.4 UGT-D-3OH-1 基因测序与分析 | 第34-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 2.6 本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 UGT-D-3OH-1 基因表达载体的构建与转化 | 第39-61页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第39-42页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 菌种的扩大培养与质粒提取 | 第42页 |
| 3.3.2 表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.3.3 表达载体转化至E.coli BL21(DE3) | 第45页 |
| 3.3.4 工程菌的诱导表达及蛋白提取 | 第45-46页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE蛋白电泳鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.6 包涵体的复性 | 第47-48页 |
| 3.3.7 糖基转移酶UGT-D-3OH-1 的酶活性检测 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-59页 |
| 3.4.1 重组载体p ET-22b-UGT的筛选及鉴定 | 第49-51页 |
| 3.4.2 重组载体p ET-28a-UGT的筛选及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.3 重组质粒p ET-22b-UGT和p ET-28a-UGT的测序 | 第52页 |
| 3.4.4 重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后的鉴定 | 第52-54页 |
| 3.4.5 SDS-PAGE蛋白电泳检测工程菌中目的蛋白的表达 | 第54-56页 |
| 3.4.6 包涵体的复性 | 第56-57页 |
| 3.4.7 糖基转移酶UGT-D-3OH-1 的酶活性检测 | 第57-59页 |
| 3.5 讨论 | 第59-60页 |
| 3.6 本章小结 | 第60-61页 |
| 第4章 工程菌BL21-UGT-28a发酵条件的优化 | 第61-72页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.3.1 初始诱导OD600nm值对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第62页 |
| 4.3.2 IPTG浓度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第62页 |
| 4.3.3 诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.4 诱导温度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第63页 |
| 4.3.5 最佳发酵条件下目的蛋白的表达量 | 第63页 |
| 4.4 结果与分析 | 第63-71页 |
| 4.4.1 初始诱导OD600nm值对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第63-65页 |
| 4.4.2 IPTG浓度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第65-67页 |
| 4.4.3 诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第67-68页 |
| 4.4.4 诱导温度对工程菌生长和目的蛋白表达量的影响 | 第68-70页 |
| 4.4.5 最佳发酵条件下目的蛋白的表达量 | 第70-71页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第71-72页 |
| 第5章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 在校期间参与科研项目 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
